SÉRODIAGNOSTIC DE LA SYPHILIS

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1 SÉRODIAGNOSTIC DE LA SYPHILIS

2 Agent infectieux : Treponema pallidum
Bactérie hélicoïdale du groupe des Spirochètes Treponema pallidum dans un tissu Microscopie électronique à balayage

3 Syphilis : Infection Sexuellement Transmissible (IST).
Les différentes appellations du nom en Europe montrent bien le cheminement de la progression de la première épidémie. Mal de Naples ou mal napolitain (pour les Français) Mal français (pour les Italiens) Mal français (pour les Espagnols) Mal espagnol (pour les Portugais) Mal français (pour les Anglais) Mal anglais (pour les Écossais) Mal français (pour les Allemands) Mal allemand (pour les Polonais) Mal polonais (pour les Russes)

4 Evolution de la maladie
Stade primaire :  chancre contenant Treponema pallidum Tests sérologiques négatifs.

5 Evolution de la maladie
Stade secondaire : (2 à 6 mois après contact) Treponema pallidum passe dans le sang et contamine divers tissus.  Apparitions de lésions cutanées et muqueuses. Tests sérologiques positifs

6 Evolution de la maladie
Stade tertiaire : 5 à 10 ans après le stade primaire.  caractérisé par diverses atteintes graves : osseuses, cardio-vasculaires, neurologiques Lésion osseuse

7 Maladie congénitale : transmission de la mère au foetus

8 Antigènes de Treponema pallidum et sérodiagnostic
Paroi : Antigène cardiolipidique  commum aux Treponèmes, bactéries et certains tissus animaux (ex : cœur de bœuf)  VDRL : recherche des anticorps sériques anti-cardiolipide Enveloppe : Antigène polyosidique  spécifique de l’espèce Treponema pallidum TPHA : recherche des anticorps sériques anti-polyoside

9 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory
PRINCIPE : ANTIGENES MIS EN JEU :

10 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory
PRINCIPE : On recherche dans le sérum la présence ou non d’anticorps dirigés contre le cardiolipide (anticorps anti-cardiolipide ou réagines de Wasserman).  Détection des anticorps par réaction d’AGGLUTINATION DIRECTE PASSIVE  Ce test est QUALITATIF ANTIGENES MIS EN JEU :

11 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory
PRINCIPE : On recherche dans le sérum la présence ou non d’anticorps dirigés contre le cardiolipide (anticorps anti-cardiolipide ou réagines de Wasserman).  Détection des anticorps par réaction d’AGGLUTINATION DIRECTE PASSIVE  Ce test est QUALITATIF ANTIGENES MIS EN JEU : Les anticorps recherchés sont dirigés contre l’ANTIGÈNE CARDIOLIPIDIQUE :  constituant de la paroi commun à tous les tréponèmes, mais aussi à des bactéries, des végétaux et certains tissus animaux.

12 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory
TEMOINS : A B C A : TÉMOIN ANTIGÈNE :

13 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory
TEMOINS : A B C A : TÉMOIN ANTIGÈNE :  absence d’agglutination, donc les particules sensibilisées avec les antigènes ne sont pas autoagglutinables.

14 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory
TEMOINS : A B C A : TÉMOIN ANTIGÈNE :  absence d’agglutination, donc les particules sensibilisées avec les antigènes ne sont pas autoagglutinables. B : TÉMOIN POSITIF :

15 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory
TEMOINS : A B C A : TÉMOIN ANTIGÈNE :  absence d’agglutination, donc les particules sensibilisées avec les antigènes ne sont pas autoagglutinables. B : TÉMOIN POSITIF :  agglutination, donc l’Ag VDRL utilisé est reconnu spécifiquement par des Ac anticardiolipides et les particules ont bien été sensibilisées.

16 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory
TEMOINS : A B C A : TÉMOIN ANTIGÈNE :  absence d’agglutination, donc les particules sensibilisées avec les antigènes ne sont pas autoagglutinables. B : TÉMOIN POSITIF :  agglutination, donc l’Ag VDRL utilisé est reconnu spécifiquement par des Ac anticardiolipides et les particules ont bien été sensibilisées. C : TÉMOIN NÉGATIF :

17 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory
TEMOINS : A B C A : TÉMOIN ANTIGÈNE :  absence d’agglutination, donc les particules sensibilisées avec les antigènes ne sont pas autoagglutinables. B : TÉMOIN POSITIF :  agglutination, donc l’Ag VDRL utilisé est reconnu spécifiquement par des Ac anticardiolipides et les particules ont bien été sensibilisées. C : TÉMOIN NÉGATIF :  pas d’agglutination, l’Ag VDRL n’est pas reconnu par des Ac autres que les Ac anticardiolipide. Le test est bien spécifique.

18 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory
Les témoins sont corrects, le test est donc validé et on peut interpréter l’essai. ESSAI : CONCLUSION :

19 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory
Les témoins sont corrects, le test est donc validé et on peut interpréter l’essai. ESSAI : AGGLUTINATION : donc il y a présence d’anticorps anti-cardiolipide dans le serum testé. CONCLUSION :

20 Test du VDRL Veneral Disease Research Laboratory
Les témoins sont corrects, le test est donc validé et on peut interpréter l’essai. ESSAI : AGGLUTINATION : donc il y a présence d’anticorps anti-cardiolipide dans le serum testé. CONCLUSION : Le patient a donc probablement été infecté par un Tréponème. Il faut confirmer ce résultat avec un Test quantitatif et SPÉCIFIQUE de Treponema pallidum, comme le test TPHA.

21 Test du TPHA Treponema pallidum hémagglutination assay
PRINCIPE : On recherche dans le sérum la présence ou non d’anticorps dirigés contre le polyoside d’enveloppe  Détection des anticorps par réaction d’AGGLUTINATION DIRECTE PASSIVE  Ce test est QUANTITATIF ANTIGENES MIS EN JEU : Les anticorps recherchés sont dirigés contre l’ANTIGÈNE POLYOSIDIQUE :  constituant de l’enveloppe spécifique de Treponema pallidum

22 Les réactifs Hématies antigène :
 Hématies de poulet sensibilisées par un lysat de Treponema pallidum et additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter L’extrait de Treponema de Reiter permet de neutraliser les anticorps qui ne sont pas spécifiques de Treponema pallidum

23 Les réactifs Hématies antigène :
 Hématies de poulet sensibilisées par un lysat de Treponema pallidum et additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter L’extrait de Treponema de Reiter permet de neutraliser les anticorps qui ne sont pas spécifiques de Treponema pallidum Hématies témoin :  Hématies de poulet additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter

24 Les réactifs Hématies antigène :
 Hématies de poulet sensibilisées par un lysat de Treponema pallidum et additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter L’extrait de Treponema de Reiter permet de neutraliser les anticorps qui ne sont pas spécifiques de Treponema pallidum Hématies témoin :  Hématies de poulet additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter Diluant : NaCl à 0,15 mol/L, pH = 7,3

25 Les réactifs Hématies antigène :
 Hématies de poulet sensibilisées par un lysat de Treponema pallidum et additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter L’extrait de Treponema de Reiter permet de neutraliser les anticorps qui ne sont pas spécifiques de Treponema pallidum Hématies témoin :  Hématies de poulet additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter Diluant : NaCl à 0,15 mol/L, pH = 7,3 Sérum (humain) de contrôle positif : prédilué au 1/20

26 Les réactifs Hématies antigène :
 Hématies de poulet sensibilisées par un lysat de Treponema pallidum et additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter L’extrait de Treponema de Reiter permet de neutraliser les anticorps qui ne sont pas spécifiques de Treponema pallidum Hématies témoin :  Hématies de poulet additionnées d’un extrait de Treponema de Reiter Diluant : NaCl à 0,15 mol/L, pH = 7,3 Sérum (humain) de contrôle positif : prédilué au 1/20 Sérum (humain) de contrôle négatif : prédilué au 1/20

27 Réaction entre un sérum positif et les hématies antigène
HEMATIES ANTIGENE

28 Réaction entre un sérum positif et les hématies antigène
Hématies sensibilisées par un extrait de Treponema pallidum cardiolipide antigène protéique HEMATIES ANTIGENE polyoside d’enveloppe

29 Réaction entre un sérum positif et les hématies antigène
Hématies sensibilisées par un extrait de Treponema pallidum cardiolipide antigène protéique HEMATIES ANTIGENE polyoside d’enveloppe Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique cardiolipide

30 Réaction entre un sérum positif et les hématies antigène
Hématies sensibilisées par un extrait de Treponema pallidum cardiolipide antigène protéique HEMATIES ANTIGENE polyoside d’enveloppe Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique cardiolipide Sérum à tester

31 Réaction entre un sérum positif et les hématies antigène
Hématies sensibilisées par un extrait de Treponema pallidum cardiolipide antigène protéique HEMATIES ANTIGENE polyoside d’enveloppe AGGLUTINATION Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique cardiolipide Sérum à tester

32 Réaction entre un sérum positif et les hématies antigène
Hématies sensibilisées par un extrait de Treponema pallidum cardiolipide antigène protéique HEMATIES ANTIGENE polyoside d’enveloppe AGGLUTINATION Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique cardiolipide Sérum à tester Adsorption des anticorps à non spécifiques de Treponema pallidum

33 Réaction entre un sérum positif et les hématies témoin
HEMATIES TEMOIN

34 Réaction entre un sérum positif et les hématies témoin
Hématies non sensibilisées HEMATIES TEMOIN

35 Réaction entre un sérum positif et les hématies témoin
Hématies non sensibilisées HEMATIES TEMOIN Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique cardiolipide

36 Réaction entre un sérum positif et les hématies témoin
Hématies non sensibilisées HEMATIES TEMOIN Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique cardiolipide Sérum à tester

37 Réaction entre un sérum positif et les hématies témoin
Hématies non sensibilisées HEMATIES TEMOIN Extrait de Treponema de Reiter antigène protéique PAS D’AGGLUTINATION cardiolipide Sérum à tester

38 Lecture des résultats +3 +2 +1 +/- -

39 Exemple de résultat Cupule

40 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN HÉMATIES AG
Réactif : Résultat : Interprétation :

41 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN HÉMATIES AG
Réactif : diluant + hématies antigène Résultat : Interprétation :

42 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN HÉMATIES AG
Réactif : diluant + hématies antigène Résultat : pas d’hémagglutination Interprétation :

43 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN HÉMATIES AG
Réactif : diluant + hématies antigène Résultat : pas d’hémagglutination Interprétation : les hématies antigène sont non autoagglutinables.

44 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
HÉMATIES TEMOIN Réactif : Résultat : Interprétation :

45 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
HÉMATIES TEMOIN Réactif : diluant + hématies témoin Résultat : Interprétation :

46 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
HÉMATIES TEMOIN Réactif : diluant + hématies témoin Résultat : pas d’hémagglutination Interprétation :

47 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
HÉMATIES TEMOIN Réactif : diluant + hématies témoin Résultat : pas d’hémagglutination Interprétation : les hématies témoin sont non autoagglutinables.

48 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
CONTRÔLE SERUM Réactif : Résultat : Interprétation :

49 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
CONTRÔLE SERUM Réactif : sérum à tester + hématies témoin Résultat : Interprétation :

50 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
CONTRÔLE SERUM Réactif : sérum à tester + hématies témoin Résultat : pas d’hémagglutination Interprétation :

51 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
CONTRÔLE SERUM Réactif : sérum à tester + hématies témoin Résultat : pas d’hémagglutination Interprétation : le sérum ne contient pas d’anticorps anti-hématies de poulet

52 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
SERUM POSITIF Réactif : Résultat : Interprétation :

53 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
SERUM POSITIF Réactif : sérum positif + hématies antigène Résultat : Interprétation :

54 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
SERUM POSITIF Réactif : sérum positif + hématies antigène Résultat : hémagglutination Interprétation :

55 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
SERUM POSITIF Réactif : sérum positif + hématies antigène Résultat : hémagglutination Interprétation : réaction efficace entre les Ac et Ag

56 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
SERUM NEGATIF Réactif : Résultat : Interprétation :

57 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
SERUM NEGATIF Réactif : sérum négatif + hématies antigène Résultat : Interprétation :

58 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
SERUM NEGATIF Réactif : sérum négatif + hématies antigène Résultat : pas d’hémagglutination Interprétation :

59 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 TÉMOIN
SERUM NEGATIF Réactif : sérum négatif + hématies antigène Résultat : pas d’hémagglutination Interprétation : réaction spécifique : l’Ag n’est pas reconnu pas d’autres Ac du sérum

60 Les témoins sont corrects,
Exemple de résultat Cupule Les témoins sont corrects, le test est VALIDE

61 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 DILTUIONS DU
1/ / / /640 1/ /2560 DILTUIONS DU SERUM TESTE

62 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + DILTUIONS DU
1/ / / /640 1/ /2560 DILTUIONS DU SERUM TESTE

63 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + + DILTUIONS DU
1/ / / /640 1/ /2560 DILTUIONS DU SERUM TESTE

64 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + + + DILTUIONS DU
1/ / / /640 1/ /2560 DILTUIONS DU SERUM TESTE

65 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + + + +
1/ / / /640 1/ /2560 DILTUIONS DU SERUM TESTE

66 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + + + + -
1/ / / /640 1/ /2560 DILTUIONS DU SERUM TESTE

67 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + + + + - -
1/ / / /640 1/ /2560 DILTUIONS DU SERUM TESTE

68 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + + + + - -
1/ / / /640 1/ /2560 DILTUIONS DU SERUM TESTE TITRE DU SERUM :

69 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + + + + - -
1/ / / /640 1/ /2560 DILTUIONS DU SERUM TESTE TITRE DU SERUM :

70 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + + + + - -
1/ / / /640 1/ /2560 DILTUIONS DU SERUM TESTE TITRE DU SERUM : 640

71 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + + + + - -
1/ / / /640 1/ /2560 DILTUIONS DU SERUM TESTE CONCLUSION : Titre : 640  80 : réaction positive significative

72 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + + + + - -
1/ / / /640 1/ /2560 DILTUIONS DU SERUM TESTE CONCLUSION : Titre : 640  80 : réaction positive significative  Existence d’une syphilis actuelle ou passée.

73 Exemple de résultat Cupule 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 + + + + - -
1/ / / /640 1/ /2560 DILTUIONS DU SERUM TESTE CONCLUSION : Titre : 640  80 : réaction positive significative  Existence d’une syphilis actuelle ou passée. Le diagnostic d’une syphilis récente nécessite un 2ème titrage sur du sérum prélevé 2 à 3 semaines après le premier . L’augmentation du taux d’anticorps est en faveur d’une syphilis en évolution.

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