Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 2007 1 Réalisation d’une Structure animalière protégée à l’Institut Pasteur pour la production et l’expérimentation.

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1 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 2007 1 Réalisation d’une Structure animalière protégée à l’Institut Pasteur pour la production et l’expérimentation sur animaux standardisés

2 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 20072 Objectifs  Production reproductive des animaux: Fournir des animaux standardisés  Expérimentation: avoir les conditions pour la réalisation de l’expérimentation dans les conditions requises pour le type de manipulation souhaitée.

3 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 20073 Référentiel normatif -1-  Directive 86-609-CEE ( 24 novembre 1986) relative à la protection des animaux utilisés à des fins expérimentales ou à d’autres fins scientifiques: assurer aux animaux des soins adéquats et empêcher les douleurs ou souffrances inutiles

4 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 20074 Soins prodigués aux animaux  Conditions de vie hygiéniques;  Limiter au maximum les restrictions apportées au comportement des animaux.  Conditions physiques de l’environnement contrôlées;  Le bien-être de l’animal doit faire l’objet d’une observation par une personne compétente afin d’éviter toute souffrance.

5 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 20075 Référentiel normatif - 2-  Directive 2004-1-CEE: application des Bonnes Pratiques de Laboratoires telles que spécifiées par les directives de l’OCDE, traite de la conformité:  Des installations d’essais  Des modes opératoires normalisés

6 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 20076 Référentiel normatif - 3 -  Directive 2000-54-CEE du 18 septembre 2000: protection des travailleurs contre les risques liés à des agents biologiques.  Classification des agents biologiques en fonction du danger qu’ils peuvent constituer pour le personnel et l’environnement,  Définition des niveaux de confinement

7 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 20077 Statut Génétique Statut Sanitaire Environnement Animaux standardisés  Trois paramètres :

8 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 20078 Définition  Animaux standardisés = animaux définis par rapport à:  Leur statut génétique,  Leur statut sanitaire, Maintenus dans un environnement contrôlé

9 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 20079 Environnement contrôlé Environnement protégé par:  Une barrière physique: maîtrise des paramètres de l’ambiance;  Séparation des secteurs: sale, propre et technique;  Procédures opératoires normalisées (soins et manipulations)

10 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200710 Statut Génétique Dépend du système d’élevage : –Colonies non consanguines (panmictiques): génétiquement non définies sauf pour certains caractères = outbred (ex: souche SWISS); –Colonies consanguines: génétiquement définies; accouplement (FxS ) > 20 générations; gènes fixés à l’état homozygote = inbred ( ex: lignée Balb/C).

11 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200711 Statuts génétiques Souris Non consanguines Swiss( OF1, NMRI…) Consanguines Balb/C; C57Black/6; CBA; DBA 2 MBT, MAI; PWK Rats Non consanguins Wistar Cobayes Albinos / Coloré HamstersConsanguins Doré (syrien)

12 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200712 Statuts sanitaires  AXENIQUE ou GERM FREE (= 0 microbe) Redérivation.  GNOTOXENIQUE: mono-,… (Gnotobiotique).  HETEROXENIQUE(agnotobio- tique): EOPS(SPF); SSC; SOPF.  HOLXENIQUE: Conventionnel Néoholoxénique: conventionnalisé Élevage sous Barrière Élevage en isolateur Animalerie conventionnelle

13 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200713 Animaux EOPS  Exempts d’Organismes Pathogènes Spécifiques  Synonyme = IOPS (Indemnes OPS) Bactéries :  Bactéries : Bordetella bronchiseptica Pasteurella sp. Salmonella Streptobacillus moniliformis Streptococci  hémolytiques(sauf groupe D) Maladie de Tyzzer Si lésions / signes cliniques : Clostridium sp. Dermatophytes Escherichia coli ( + sérotype) Klebsiella pneumoniae / oxytoca Proteus sp. Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Treponema cuniculi (+ sérotype) Yersinia pseudotuberculosis

14 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200714 Animaux EOPS Parasites :   Arthropodes   Helminthes   Eimeria sp.   Giardia sp.   Spironucleus sp.   Klosiella sp.   Encephalitozoon cuniculi   Toxoplasma gondii   Trichosomoides crassicauda Virus: Sérologie ( tous les 3 mois) :  Virus de la pneumonie de la souris (PVM)  Virus de la maladie hémorragique du lapin (RHDV)  Poxvirus du lapin (myxomatose)  Rotavirus du lapin  Virus Sendaï  Virus simien 5 (SV 5)

15 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200715 Statut Génétique Statut Sanitaire Environnement Animaux standardisés + confinement  Quatre paramètres : confinement

16 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200716 Le niveau de confinement  La manipulation d’agents biologiques (virus, bactéries, parasites…) est la composante majeure de l’expérimentation animale.  L’évaluation du risque inhérent à la manipulation d’agents pathogènes a généré la même classification que pour les laboratoires de même ordre.

17 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200717 Le niveau de confinement  Cette classification a été étendue à la manipulation des Organismes Génétiquement Modifiés = OGM  À chaque niveau de risque correspond un niveau de confinement:

18 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200718 Correspondance LaboratoireAnimalerie L1 A1(P1) conventionnel L2A2(P2) L3A3(P3) L4A4(P4)

19 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200719 Définitions Niveau 1 Risque faible (individu et collectivité) Niveau 2 Risque modéré pour l’individu, limité pour la collectivité Niveau 3 R. élevé pour l’individu faible pour collectivité Niveau 4 Risque élevé (individu et collectivité)

20 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200720 Caractéristiques du projet Création d’une animalerie répondant aux standards internationaux avec: Création d’une animalerie répondant aux standards internationaux avec:  Une zone de production : élevages reproducteurs d’animaux standardisés;  Une zone d’expérimentation: boxes individualisés comportant une aire de manipulation et une aire de stabulation

21 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200721 Principes généraux 1- Séparation des types d’activité: 1- Séparation des types d’activité: REPRODUCTION REPRODUCTION/EXPERIMENTATION 2- Séparation des espèces, des souches et des lignées 2- Séparation des espèces, des souches et des lignées 3- Etage technique accessible de l’extérieur 3- Etage technique accessible de l’extérieur

22 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200722 Etage technique

23 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200723 Zone de reproduction: Animalerie d’élevage pour animaux EOPS

24 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200724 Capacités de production escomptées Au démarrage:  Souris: 60 000 de diverses souches et colonies.  Rats: 3 000 Non consanguins  Cobayes: 2 000  Hamsters: 1 000 syriens

25 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200725 Principaux éléments de la barrière:  Zone d’élevage isolée par une barrière de pressions positives  Accès réglementé  Matériel autoclavé, à l’entrée  Flux unidirectionnels  Séparation des zones " Sales / Propres" " Sales / Propres"

26 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200726 Paramètres physiques Environnement: 6 salles d’élevage indépendantes, de 30 m 2 chacune (ILAR*)  P° positives;  θ = 22 + 1°C;  H° = 55 + 5%;  Ventilation: 20 renouvellements horaires;  Filtres HEPA (H14) au niveau de chaque salle  Filtration de l’air à l’extraction :HEPA + Charbon * Institute For Laboratory Animals Research

27 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200727 Schéma de principe: gradient de pressions Couloir sale Zône centrale propre Élevage PROPREPROPRE SALESALE SALESALE +2 +4 +2 0 Élevage +2

28 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200728 Schéma de principe: les flux Couloir sale Matériel stérile Arrivé personnel Zône centrale propre Élevage PROPREPROPRE Arrivée animaux SALESALE SALESALE Élevage

29 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200729 zone d’expérimentation de niveau II

30 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200730 La Barrière et le confinement  Zone d’élevage isolée (pression positive)  Accès réglementé  Matériel autoclavé, stérilisé à l’entrée  Flux unidirectionnels  Séparation des zones " Sales / Propres" " Sales / Propres"  Confinement II

31 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200731 Structure d’un boxe d’expérimentation PSM II Paillasse Stabulation PROPREPROPRE COULOIR SALE SALESALE

32 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200732 Ventilation des boxes Air neufAir viscié

33 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 200733 Prestations à l’échelle du pays En 3 phases: 1.2ème semestre 2008: fourniture d’animaux, 2.Année 2009: accueil d’expérimentateurs sur cahier de charge et établissement d’un devis, 3.Plus tard(?): réalisation d’études à façon.

34 Z. Benlasfar / congrès "a3p" / Hammamet 24 - 25 mai 2007 34 Merci pour votre attention..!..