Historique 1953 Découverte de la structure de l’ADN

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1 Historique 1953 Découverte de la structure de l’ADN
par Watson et Crick Le principe de fonctionnement d’une puce brevetée par Edwin Southern Développement des puces ADN par Davis & Brown Affymetrix commercialise une puce ADN

2 GENOME (ensemble des gènes d’une cellule) TRANSCRIPTOME (ensemble des transcrits d’une cellule à un instant donné) PROTEOME (ensemble des protéines présentes dans une cellule à un instant donné)

3 Génome humain 30000 gènes

4 Puce à oligonucléotides
Filtres haute densité Lames de verre Puce à oligonucléotides Membrane en nylon -Taille : 12 cm x 8 cm -Taille des spots : 0.5-1mm -Densité : quelques centaines de spots/cm2 clones par membrane - Marquage radioactif Lame de verre à revêtement chimique -Taille : 5,4 cm x 0,9 cm -Taille des spots : ~100μm -Densité : spots/cm2 clones par lame - Marquage fluorescent Lame de verre à revêtement chimique - Taille : 1,28 cm x 1,28 cm -Taille des spots : ~20μm Densité : jusqu’à spots/cm2 nucléotides par lame Marquage fluorescent

5 Applications

6 Comparaison des profils d’expression
Exemples d’application : diagnostiques médicaux Cellules tumorales du foie Cellules de foie sain Comparaison des profils d’expression par microarray Identification des gènes différentiellement exprimés Applications similaires pour le diagnostic et la recherche: -de maladies génétiques -de maladies cardio-vasculaires - recherche de marqueurs du vieillissement

7 Exemples d’ Applications- Environnement
1) Détection de bactéries pathogènes dans un échantillon biologique Puce ADN contenant des sondes dirigées contre les ARN16S de plusieurs bactéries pathogènes (Salmonelles, Legionelles, Staphylocoques…) Eau, produits alimentaires, tissus infectés… prélèvements Amplification des gènes d’ARN 16S présents + marquage Caractérisation rapide du ou des pathogènes présents dans le prélèvement (résultats obtenus en 24h)

8 Conclusion - Révolution technologique - Efficacité et rapidité