Rappel: Équilibre acide-base Spectrophotométrie

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1 Rappel: Équilibre acide-base Spectrophotométrie
CHMI 2227F Biochimie I Rappel: Équilibre acide-base Spectrophotométrie CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

2 Équilibre acide-base - Acides forts
HCl  H+ + Cl- pH = - log [H+] Où [H+] est en unités de concentration molaires (M). CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

3 Équilibre acide-base - Acides faibles
Où: HA est l’acide non-dissocié. A- est la base conjuguée de l’acide HA. HA H+ + A- Ka = [H+] x [A-] [HA] pKa = -log Ka Ka = 1 10pKa CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

4 Équilibre acide-base - Acides faibles
Ka = [H+] x [A-] [HA] pH = - log [H+] pH = pKa +log [A-] [HA] CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

5 Équilibre acide-base - Acides faibles
HA H+ + A- pH Point de mi-équivalence: 50% HA 50% A- 100% A- pKa pH au point de mi-équivalence = pKa 100% HA 0.5 CHMI E.R. Gauthier, Ph.D. NaOH

6 Équilibre acide-base - Acides faibles
Exemple 1: Quel est le pH d’une solution de 0.1M d’acide acétique (Ka = 1.76 x 10-5M). CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

7 Équilibre acide-base - Acides faibles
Exemple 2: Quel sera le pH d’une solution composée de 0.3 M d’acide acétique et de 0.1 M d’acétate (pKa = 4.8). CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

8 Spectrophotométrie Cuvette Source lumineuse Détecteur Lumière Lumière
incidente Lumière transmise Lumière incidente Lumière transmise CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

9 Spectrophotométrie CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

10 Spectrophotométrie Intensité d’absorbance Longueur d’onde (nm) 400 450
500 550 600 CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

11 Spectrophotométrie CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

12 Spectrophotométrie - équation de Beer-Lambert
Where: T = intensité de transmission A = absorbance l = trajet optique (épaisseur de la cuvette)(cm) c= concentration (M) e = coefficient d’absorption (M-1cm-1) -logT = log (1/T) = ecl =A CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

13 Courbe standard Partie non-linéaire de la courbe ATTENTION!!!
Intensité d’absorbance Concentration(unités) 3 6 9 12 Absorbance de l’inconnu Concentration de l’inconnu Partie non-linéaire de la courbe ATTENTION!!! CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

14 Spectrophotométrie CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.