Tests unitaires à lecture non automatisée

Présentation au sujet: "Tests unitaires à lecture non automatisée"— Transcription de la présentation:

1 Tests unitaires à lecture non automatisée
CHU Saint Louis Paris Colloque de Veille Virologique 2009 Place des Tests unitaires à lecture non automatisée En dehors du laboratoire François Simon CHU St Louis F Simon

2 Cette présentation Réglementation du dépistage et TDR en 2009
Les difficultés du dépistage en 2009 Evaluation hors laboratoire des tests marqués CE sur sang total et salive TDR et perspectives F Simon

3 Les TDR et la HAS 2009 les principes
Dépistage de la population générale (de 15 à 70 ans) hors notion d’exposition En parallèle, renforcement d’un dépistage régulier (annuel) pour les populations à risque par MG +++ Les services de médecine universitaire ; Les centres de planification et d’éducation familiale ; Les centres de protection maternelle et infantile Les dispositifs d’accès aux soins primaires Les soins hospitaliers Les services d’urgences hospitalières ?? A voir selon les études en cours F Simon

4 Les TDR et la HAS 2009 les moyens
Renforcer les dispositifs existants Utilisation des TDR en médecine générale Accès direct aux LAM sans prescription TDR en campagne de dépistage, en structures alternatives décentralisées en populations cibles F Simon

5 Tests sur prélèvements hors laboratoires sang total /capillaire/salive
La réglementation Française restreint l’utilisation des tests de dépistage du VIH à des prélèvements sériques ou plasmatiques (arrêté du 28/04/2003) L’utilisation des tests sur sang total /capillaire est possible dans d’autres pays en structures associatives, en biologie délocalisée, au cabinet du médecin Anecdotique en dehors de l’Afrique et des USA F Simon

6 Les difficultés du dépistage
en 2009 - La diversité des souches - Les primo infections - PTME, PPE, HAART F Simon

7 La diversité des VIH : les antigènes des kits se basent sur les épitopes des sous types B et A des VIH 1 et 2 HIV-1 4 groupes HIV-2 HIV-1 O HIV-1M HIV-1N A C virus mosaïques B D (E) G H (I) J F E Plus de 40 formes recombinantes ouCRFs K ? A HIV-1 P B CRF02 50% d’infection par des sous types B 48% par non B , 2% par HIV-2, HIV-O F Simon

8 l’affinité et l’avidité des anticorps
La primo infection Et la cinétique d’apparition des anticorps l’affinité et l’avidité des anticorps évolue au cours du temps Semaines post infection F Simon D’Après Cunningham et al

9 Risque de transmission VIH selon les stades de l’infection
1/25 Le diagnostic de primo infection est essentiel pour le patient et son entourage 1/1000 F Simon

10 Traitements de la primo infection
(Prospective Randomized Trial Primo-SHM) F Simon Steingrover et al, croi 2008_

11 Marqueurs et stades de l’infection VIH
F Simon

12 Délai plus marqué d’apparition des bandes
de réactivité au WB NEGATIVE VIRAL LOAD DNA PCR SUBTYPE A DISTANT F Simon

13 Blocage d’apparition des anticorps
sous HAART F Simon

14 L’usage des TDR hors laboratoire
F Simon

15 TDR sang total et salive
Les TDR actuels marqués CE évalués –utilisés sur sérum ne détectent que les anticorps pour la plupart sont considérés comme équivalents en terme de sensibilité en primo infection aux tests ELISA de troisième génération pour les meilleurs d’entre eux difficilement évaluables sur sang total /liquide créviculaire pour les primo infections F Simon

16 Ré-évaluation des 6 tests CE sang total et « salive »
St Louis - AFSSAPS Vikia bioMérieux Determine Inverness Combo Ag AC OraQuick sang et salive Insti Biolytical 5 tests marqués CE pour l’utilisation sur sang total, un pour la salive F Simon

17 Sensibilité de 6 tests de diagnostic rapide marqués CE sur sang capillaire et salive en situation de soins Objectifs Estimer la sensibilité et praticabilité des TDR avec 200 patients infectés par VIH1 ou VIH2 et représentant la diversité des situations cliniques et virologiques et de 20 patients séronégatifs Etudier la des TDR en situation hors laboratoire, par un personnel médical non biologiste F Simon

18 Sensibilité de 6 tests de diagnostic rapide marqués CE sur sang capillaire et salive en situation de soins Etude prospective biomédicale par Afssaps / CPP CHU St Louis 200 volontaires VIH + & 20 VIH- (blind reading) Prélèvements capillaires salivaires et veineux Tous les tests marqués CE pour salive et sang total Résultat lu(s) comme positif, douteux, négatif, ou invalide contrôle interne du test non lisible Les tests négatifs ou invalides retestés sur le sérum congelé F Simon

19 Patients infectés par VIH
Oraquick Oral fluid Ac Blood Vikia blood Determine Ag +Ac 4th blood INSTI Negatif 27 11 3 10 7 2 Douteux 6 1 4 Invalide 33 Positif 163 183 196 185 153 192 Sensibilité 86.5% p = 0.02 94.5% 98.5% 94.9% 95.8% 99% 60 tests ont été lus comme négatifs particulièrement avec Oraquick salive Au moins un négatif pour 36/200 patients : 20B, 13 non B , 2HIV-2, 1 HIV0 taux élevé d’invalides avec le Determine 4th Aucune détection d’ag p24 y compris en primo infection (p24 à 380pg/ml)

20 prélèvements avec au moins deux TDR négatifs sur sang total
I D ( n = 36) (Chronic stage or primary infection) Genotype Oraquick sang Vikia Determine INSTI Determine 4th GEN 50 (HIV- 0) negative + doubtful 66 (A, TTT, CV<25) B Negative 67 (primo infection)* 70 (A, TTT ,CV <25) 73 (primo infection) F +/- 128 (A, TTT ,CV <25) Non typable 184 ( primo infection il y a 4 mois) * Ag P24 = 380 pg/mL Résultats nettement améliorée sur les sérum correspondant F Simon

21 Résultats comparés tous les TDR positifs n=164 > 1 test negatif
Mediane âge 41 44.5 Genre féminin (n,%) 28 (17%) 6 (16.6%) Stade C CDC (n,%) 37 (22.5%) 11( 30.5%) Caucasien Afrique sub-sahara Autres 93 (56.7%) 53 (32.3%) 18 (11%) 26 (72.2%) 8 (22.2%) 2(5.6%) infection HBV-HCV (n,%) 14 (8.5%) 3 (8.3%) HAART (n,%) 108 (65%) 29 (80.5%) Médiane date d’ infection 2002 2001 Médiane CD4 416 500 HIV VL <200 cp/ml (n,%) 86 (52.4%) HIV-1 B subtype (n,%) 106 (64.3%) 20 (55.5 %) F Simon

22 Synthèse des résultats TDR Sang total – Salive hors laboratoire
- Oraquick Oral = manque de sensibilité (p = 0.02). > 5% faux négatifs en sang capillaire - Incapable de reconnaitre les primo infections , y compris après plusieurs semaines - sensibilité nettement améliorée lors du passage au sérum F Simon

23 Détection de l’ag P24 sur le sérum par Determine 4G
32 patients ag p24 + AgP24 (pg/ml) > 400 100-50 50-5 Référence EIA P24 VIDAS 6 4 5 17 Determine 4eme G Ag POSITIF 3 1 F Simon JC Tardy , Lyon 2009

24 Primo infection séquentielle
exemple Primo infection séquentielle À J0 CV copies/ml ; CRF02 TDR AC TDR Ag EIA Ag+AC AC P24 WB J0 + 13 >400 +2j 11 7 ND +6j 8 18 79 +13j 7,4 20 Env F Simon JC Tardy , Lyon 2009

25 Nouvelle génération de TDR & Primo –infection
- Le premier TDR de 4ème génération (Determine 4G) doit s’améliorer en terme de sensibilité de détection de l’ag P 24 D’autres compétiteurs en course vpnt « tirer » ces TDR « combo » vers une meilleure sensibilité Mais le sang total restera toujours une matrice difficile et de sensibilité inférieure au sérum F Simon

26 Difficulté d’évaluation sur sang total et salive des primo infections
Limites des tests de diagnostic rapide sur sang capillaire et salive en situation hors laboratoire Difficulté d’évaluation sur sang total et salive des primo infections Sensibilité moindre (primo-infection) que les tests Elisa donc risque de faux-négatifs y compris dans les mois suivants la séroconversion en EIA Lecture subjective ; fréquence des faux positifs Archivage difficile (photo ? ), DBS ? Négligence des autres IST, absence de TDR pour HBV marqué CE obligeant à EIA, S, F Simon

27 Quand rendre un TDR négatif par rapport à un risque HAS 2008
Un TDR négatif 3 mois après l’exposition supposée signera l’absence d’infection pour ce risque Ce délai pourrait être trop court compte tenu de la moindre sensibilité des TDR en primo infection, particulièrement lors d’une primo infection par une souche divergente F Simon

28 Et tous les patients volontaires pour l’étude
J Pavie A Rachline E Laforgerie W Rozenbaum C Delaugerre JM Molina F Simon Et tous les patients volontaires pour l’étude CHU Saint Louis Paris F Simon