REGULATION DIFFERENTIELLE DES GENES HOX DANS L’ENDOMETRIOSE

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1 REGULATION DIFFERENTIELLE DES GENES HOX DANS L’ENDOMETRIOSE
Delphine Héquet Equipe Vaiman Inserm U1016

2 L’ENDOMETRIOSE PATHOLOGIE GYNECOLOGIQUE BENIGNE
10 % FEMMES EN AGE DE PROCREER DOULEURS PELVIENNES CHRONIQUES ET/OU INFERTILITE PRESENCE ECTOPIQUE D’ENDOMETRE, STROMA ET GLANDE PREDOMINANCE PELVIS TRAITEMENT MEDICAL PEU EFFICACE, RECOURS CHIRURGIE

3 L’ENDOMETRIOSE PHYSIOPATHOLOGIE MAL CONNUE
THEORIE DE L’IMPLANTATION,Sampson 1927 ETUDES FAMILIALES PATHOLOGIE METASTATIQUE BENIGNE

4 L’ENDOMETRIOSE micro array study
Total RNA of all cellular types from 6 patients pools Eutopic versus ectopic 5600 down- or up-regulated genes down-regulation of HOX-A and HOX-B genes up-regulation of HOX-C genes and HOX-D genes L’ENDOMETRIOSE

5 GENES HOX 39 GENES REPARTIS EN 4 CLUSTERS SUR 4 CHROMOSOMES CONSERVES
FACTEURS DE TRANSCRIPTION IMPLIQUES DANS LE DEVELOPPEMENT COLINEARITE ENTRE POSITION DU GENE DANS LE CLUSTER ET REGION EMBRYONNAIRE REGULEE DEREGULATION CONNUE DANS LE CANCER DE L’OVAIRE INVERSE DES REGULATIONS DANS L’ENDOMETRIOSE

6 OBJECTIFS CONFIRMATION DEREGULATION DES GENES HOX EN IMMUNOHISTOCHIMIE
RECHERCHE DES MECANISMES DE DEREGULATION DES GENES HOX

7 HYPOTHESE DEREGULATION LINEAIRE LE LONG DES CLUSTERS
ARN ANTI-SENS DE LONGUEURS CROISSANTES PREDOMINANTS SUR LE CLUSTER A POUR L’ENDOMETRIOME PREDOMINANTS SUR LE CLUSTER C POUR L’ENDOMETRE EUTOPIC

8 MATERIELS ET METHODES COLLECTION DE TISSUS Prospective
Consentement signé Patientes endométriosiques : endomètre et endométriome Patientes témoins : endomètre Confirmation histologique du diagnostic d’endométriose Données cliniques connues : âge, antécédents, gestité/parité, période du cycle, traitement en cours, stade endométriose, intervention réalisée Echantillons de tissus provenant des mêmes patientes pour immunohistochimie et étude génétique.

9 MATERIELS ET METHODES IMMUNOHISTOCHIMIE
Tissus fixés dans formaldéhyde pendant heures Préparation des tissus par bains successifs de toluène, alcool, paraffine Inclusion en paraffine Coupes sériées au microtome rotatif, tous les 4 microns Coloration HES rapide (bains successifs de toluène et alcool 100%,95%,70%, Hématoxilline, Eosine) et standard Immunomarquage : anticorps antiHOX, Anti HOX A1, A4, A10, A11, C4, C8 e.

10 MATERIELS ET METHODES EXTRACTION ARN
Tissus immédiatement congelés au bloc opératoire dans l’azote liquide et conservés à -80°C Dans Trizol REVERSE TRANSCRIPTASE Choix d’amorces spécifiques, en intergéniques dans chaque cluster HOX A et HOX C en antisens, 23 amorces dans chaque cluster 1ug d’ARN Traitement à la DNase PCR 1uL de cDNA spécifiques PCR-q 2uL de cDNA spécifiques

11 RESULTATS PRELIMINAIRES
Pool de 3 patientes Endometre eutopique et endometriome r=0.242 C13 C12 C11 C10 C9 C8 C4

12 RESULTATS PRELIMINAIRES
Pool de 3 patientes Endometre eutopique et endometriome r=0.242 A13 A11 A10 A9 A7 A6 A5 A4 A3 A2 A1

13 ETAPES SUIVANTES IMMUNOHISTOCHIMIE
Immunomarquage en cours, titration des anticorps ARN ANTISENS Contrôle et confirmation des données sur échantillons de patientes individuelles Etude de l’expression des gènes HOX et recherche d’antisens dans l’endomètre de patientes non endométriosiques Northern Blot 3’ RACE