Quynh T. Phan1, Carter L. Myers1, Yue Fu1,2, Donald C. Sheppard3, Michael R. Yeaman1,2, William H. Welch4, Ashraf S. Ibrahim1,2, John E. Edwards Jr.1,2,

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1 Quynh T. Phan1, Carter L. Myers1, Yue Fu1,2, Donald C. Sheppard3, Michael R. Yeaman1,2, William H. Welch4, Ashraf S. Ibrahim1,2, John E. Edwards Jr.1,2, Scott G. Filler1,2*

2  Candida albicans :  Ascomycota, Saccharomycetes.  Organisme commensal saprophyte, mais…  Provoque chez patients immunodéprimés des infections fongiques types, candidoses et candidémies à fort taux de mortalité (40%)  Un facteur important à la virulence est l’invasion des cellules endothéliales et épithéliales orales de l’organisme par induction de l’endocytose de Candida albicans.

3 Par quel(s) mécanisme(s) Candida albicans induit-il ce phénomène?

4  Protéines de la famille ALS (Agglutinin Like sequence)  Als 1, Als 3 et Als 5 présentent une structure en feuillets β antiparallèles retrouvés dans la superfamille des immunoglobulines.

5  Par quelle protéine Als l’intéraction se fait elle?  Als 3 est un bon candidat dans l’adhérence aux cellules endothéliales. Baisse de l’endocytose Baisse de l’endocytose mais pas de l’association avec les cellules.

6  Le mutant ΔAls3 ne fixe plus N- Cadherin des cellules endothéliales.  Le mutant ne fixe plus E-Cadherin des cellules épithéliales orales.  Als3 est donc nécessaire pour la fixation de C. albicans sur N-Cadherin sur les cellules endothéliales et sur E-Cadherin des cellules épithéliales orales.

7  Indépendance de la souche  Als3 belle et bien exprimée

8  Co localisation de N-cadherin, actine et de C.albicans wt  Abolition de co localisation en absence de als3  Récupération sur la souche complémentée  Als3 impliqué dans l’endocytose

9  Co localisation de E-cadherin, actine et de C.albicans wt  Abolition de co localisation en absence de als3  Récupération sur la souche complémentée  Als3 impliqué dans l’endocytose

10  Baisse importante de la virulence en absence de la protéine Als3 à la fois chez les cellules endothéliales et épithéliales orales.

11 Utilisation de billes recouvertes de partie N-term de Als1 et Als3. Incubation avec cellules endo/epith ainsi qu’avec des CHO exprimant soit N-cadherin soit E-cadherin  Forte endocytose et adhésion de Als3 aux N-cadherin et E-cadherin.  Als 3 fixe directement N ou E- cadherin et induit l’endocytose.  Le domaine de fixation est situé sur la partie N-term de Als1 et Als3

12 Distributions différentes des charges négatives. Bleu = Très négatif Domaines N1 contenant les acides aminés hydrophobes.

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14  Als3 agit comme invasine et induit l’endocytose.  Se lie par domaine Nterm aux N et E-cadherin  L’absence de Als3 se répercute par une baisse de la virulence de C.albicans  Als3 fonctionne comme un mime moléculaire des cadhérines facilitant l’invasion des cellules endothéliales et épithéliales orales.

15  Essais de vaccination de souris par Als3 recombinante produisant une bonne protection.  Identification des autres protéines humaines potentiellement impliquées dans l’endocytose de C.albicans.  Etudes des autres protéines de la famille ALS telles que Als5.