Classe Bio 2 Briday Justine Joly Sandrine Lazzarin Nathalie.

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1 Classe Bio 2 Briday Justine Joly Sandrine Lazzarin Nathalie

2 La chromatographie d'exclusion

3 Principe La chromatographie d'exclusion permet la séparation des molécules à travers un gel poreux en fonction du poids moléculaire de la protéine. En fonction: -de la taille -de la forme -poids moléculaire

4 Il existe 2 types de phases
La phase stationnaire: elle est constituée de billes de polysaccharide La phase mobile:elle est constituée d'un éluant (eau,tampon pH),il sert à entraîner les molécules du mélange.

5 Passage à travers la colonne
Les grosses molécules sont éluées en premier car leur volume est supérieur à celui du volume des billes. Les petites molécules sont exclus en dernier de part leur petit volume,elles subissent des frottements,leur migration est freinée.

6 Durée de rétention dans la colonne
La durée de séjour dans la colonne augmente lorsque le poids moléculaire de la molécule diminue

7 Choix du type de gel Le choix du type de gel est effectué selon le domaine de fractionnement.

8 Qu'est ce que le domaine de fractionnement?
C'est la gamme des masses molaires possibles pour lesquelles il y a : -diffusion partielle -diffusion totale -englobement de la masse molaire de la molécule

9 Les différents volumes
Ainsi on note plusieurs volumes lors de la chromatographie: -le volume d'élution de la molécule -le volume d'exclusion du gel (volume d'élution d'une molécule non retardée par le gel) -le volume total du gel qui correspond au volume des billes.

10 Conclusion La chromatographie d'exclusion va permettre la séparation de différentes molécules selon leur taille.