Technique d’antibiogramme des Staphylocoques (Staphylococcus aureus)

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1 Technique d’antibiogramme des Staphylocoques (Staphylococcus aureus)
Dr H.TALI-MAAMAR – EHS MAOUCHE INSP – 12 AVRIL 2006

2 Principaux caractères bactériologiques
Espèce type: S.aureus Cocci à Gram positif Aéro anaérobie facultatif, non exigeant Catalase +, oxydase –, O129 R Coagulase, dégradation du mannitol, production d’hémolyse, novobiocine. Milieux sélectifs: Chapman, Baird Parker

3 Culture sur milieu solide

4 Pouvoir pathogène - Prélèvements
Infections communautaires et nosocomiales Infections cutanéo-muqueuses (folliculite, furoncule, anthrax) Septicémies Intoxications alimentaires Infections urinaires Pus divers Hémoculture Prélèvements nasaux Prélèvements cutanés Urines LCR Aliments

5 Sensibilité aux antibiotiques
194…: apparition des premières souches de S.aureus résistantes à la pénicilline 196…: apparition des souches résistantes à la méthicilline 199… : Souches de sensibilité intermeédiaire à la vancomycine SARM et résistances associées aux aminosides, macrolides, fluoroquinolones. 200… :Plus récemment caractériseation de souches de SARM, virulentes, responsables d’infections communautaires.

6 Antibiotiques à tester (Liste standardisée, spectre d’activité, disponibilité, indication clinique)
Bêtalactamines: Pénicilline G Oxacilline Aminosides: Amikacine (H) Gentamicine Macrolides: Erythromycine Clindamycine Pristinamycine Glycopeptides Vancomycine (H) Autres: Ofloxacine Acide fusidique Chloramphénicol Tétracyclines Cotrimoxazole Fosfomycine (H) Rifampicine Cefoxitine: pour rechercher la résistance à l’oxacilline Novobiocine: diagnostic Composé vibriostatique O129: diagnostic

7 Test de sensibilité aux antibiotiques (Technique standardisée – normes NCCLS)
Antibiogramme ppt dit Tests complémentaires Milieu: Mueller Hinton Inoculum: 0,5 Mc Farland Disques d’antibiotiques (cf liste) Interprétation: valeurs critiques Contrôle de qualité: S.aureus ATCC 25923 Screening test à l’oxacilline Recherche de la PLP2a Détermination de la CMI Recherche de la pénicillinase: en cas de problème d’interprétation à l’ATBgramme Recherche de la résistance aux glycopeptides.

8 Staphylocoques et bêtalactamines

9 Phénotypes de résistance aux bêtalactamines
Mécanisme Pénicilline G Pénicilline A Carbox/ Uréido ATB + inhibiteur de bêtalactamase Pénicilline M Céphalosporines Carbapénèmes Phénotype sauvage S Pénicillinase R Modification de PLP2a gène mecA BORSA Pase hyperproduite Souches borderline MODSA Modif. PLP (non 2a) Absence de Pase r

10 Recherche de la méthicillino-résistance
Technique Contrôle de qualité Observation Test à la cefoxitine (30µg) -Antibiogramme -MH -0,5 Mc Farland S.aureus ATCC 25923 Normes NCCLS: S.aureus: R si ≤ 19mm SCN: R si ≤ 24mm Screening test MRSA -MH 4% NaCl -Oxacilline à 6µg/ml -Ensemencement / spot S.aureus ATCC 29213 S.aureus ATCC 43300 S.aureus ATCC 43866 Test peu reproductible pour les SCN Recherche de la PLP2a -Agglutination Contrôle selon Kit Technique rapide, recommandée en cas de diagnostic d’urgence et ou d’infection grave. CMI à l’oxacilline -MH 2% NaCl Technique de référence Obligatoire pour la confirmation des SCN MetiR.

11 Recherche des MRSA screening test
Souche à tester S.aureus ATCC 43866 S.aureus ATCC 29213 S.aureus ATCC 43300 Screening test

12 Recherche des MRSA Recherche de la PLP2a
Souche MRSA + Souche MRSA -

13 Staphylocoques et macrolides

14 Phénotypes de résistance aux macrolides
Mécanisme Phénotype Erythro Azithromycine Linco Clinda SA (SB) Pristina Phénotype sauvage Sensible S Modification de la cible MLSbi R MLSbc Inactivation enzymatique L s LSa s/R ? Sa (R) Efflux S/I/R S/R E

15 S.aureus MLSb inductible

16 S.aureus MLSb constitutive

17 Staphylocoques et aminosides

18 Phénotypes de résistance aux aminosides
Phenotype Mécanisme Kanamycine Amikacine Tobramycine Gentamicine Sauvage Inactivation enzymatique S K R KT KTG

19 Règles générales d’interprétation de l’antibiogramme
ANTIBIOTIQUES OBSERVATIONS Bêtalactamines: Pénicilline G Oxacilline Réponse valable pour: pénicilline A, carboxy et uréido-pénicilline Résistance croisée à toutes les bêtalactamines Macrolides: Erythromycine Clindamycine Pristinamycine Si phénotype MLSBi: résistance croisée avec azithromycine Si phénotype MLSBc: résistance croisée avec azithromycine, spiramycine et lincosamides Réponse valable pour la lincomycine * Réponse valable pour les synergistines Aminosides: Amikacine Gentamicine Résistance d’expression faible in vitro, tenir compte du diamètre de la kanamycine Résistance croisée à tous les aminosides utilisés en thérapeutique Glycopeptides: Vancomycine Tout diamètre <17mm est une indication à la CMI *: Si phénotype L, résistance à la Lincomycine avec diminution de l’activité de la Clindamycine.