But du TP => Déterminez la masse moléculaire de la GFP

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1 But du TP => Déterminez la masse moléculaire de la GFP
1ère étape => extraction des protéines Centrifugations des bactéries pour obtenir un culot de bactéries (tubes 2 et 3). Extraction du culot de bactéries (du tube 2 et 3) pour réaliser une lyse. Prélèvement du surnageant, après réalisation de la lyse, contenant les protéines (tubes 1 et 4). Protéines des bactéries du tube 2 Tube 4 Protéines des bactéries du tube 3 Tube 3 Tube 2 Tube 1 Culot de bactéries

2 2ème étape => purification de la GFP
Gel sans SDS contenant les protéines de bactéries en migration On réalise une électrophorèse sans SDS pour purifier la protéine GFP On observe le résultat sous lumière U.V GFP isolée On découpe les bandes de gel contenant la GFP native purifiée GFP purifiée

3 3ème étape => détermination de sa masse moléculaire (Da)‏
On obtient une solution de GFP purifiée en faisant tremper les bandes de gel contenant la GFP purifiée dans de l’eau GFP purifiée Protéines de bactéries sans GFP Protéine de bactéries avec GFP Protéines de masses connues en migration On réalise une autre électrophorèse avec SDS pour pouvoir déterminer à l’aide de protéines connues la masse moléculaire de la GFP GFP purifiée en migration Protéine des bactéries avec GFP en migration Protéines des bactéries sans GFP en migration

4 Observation du résultat de la migration sous lumière U.V
GFP dans les protéines de la méduse GFP isolée Coloration du résultat au bleu de comassie pour observer toutes les bandes de protéines ayant migré dans le gel Coloration des protéines avec GFP Coloration des protéines sans GFP Coloration de la GFP isolée

5 Grâce aux protéines de masse connues on peut obtenir la courbe qui permet de déterminé la masse moléculaire des protéines Points expérimentaux Equation de la droite On sait que la mobilité relative de la GFP est de 5,6. Sa masse moléculaire est donc de 27,15 Da

6 Fait par : - Haiddi Monika Laura Loïc - Yann