Sérogroupage des Salmonella par Christiane Joffin

Présentation au sujet: "Sérogroupage des Salmonella par Christiane Joffin"— Transcription de la présentation:

1 Sérogroupage des Salmonella par Christiane Joffin

2 POURQUOI ? Obtenir la formule antigénique qui désigne le SÉROVAR, seul moyen de préciser l’identification d’une Salmonella

3 QUE RECHERCHE T’ON ? Ag O de paroi Ag H du flagelle pour les souches mobiles Ag Vi de la micro-capsule

4 1- Les antigènes des Salmonella

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6 Voir dicitonnaire p 299

7 2- Le principe du sérogroupage des Salmonella

8 en utilisant des Ac connus
COMMENT ? Après l’identification biochimique du genre Salmonella, on réalise à partir d’une culture PURE sur milieu non sélectif (GO, MH, Kligler) : une identification des Ag O, H (et Vi) de la bactérie en utilisant des Ac connus par une technique d’agglutination directe sur lame.

9 Procédure du sérogroupage
Identifier : d’abord les Ag O de paroi, puis les Ag H de flagelle et éventuellement l’Ag Vi en utilisant des Ac connus spécifiques des Ag O (Ac anti O), des Ag H (Ac anti H) et de l’Ag Vi. Si les bactéries ont des Ag spécifiques des Ac utilisés connus, il va y avoir union Ag / Ac avec formation d’un réseau volumineux visible sous forme d’un agglutinat.

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11 Agglutination des Salmonella par suite réaction
Ag O/ Ac anti O Agglutination des Salmonella par suite d’une réaction Ag H / Ac anti H

12 3- Les réactifs pour le sérogroupage des Salmonella
Voir dictionnaire p 296

13 Ac fabriqués par des lapins et obtenus en recueillant leur sérum
Origine des Ac : Ac fabriqués par des lapins et obtenus en recueillant leur sérum COÛT : 30 € les 3 mL 10 € par mL 10 000 € par L !!!!!!!!!!!!!!!! Soit 0,300 Kg d’OR.

14 3-1- Les Ac anti Ag O Des sérums O mélange
Sérums (contenant un grand nombre d’Ac différents) : 6 sérums mélange (Omx : OMA, OMB, OMC, OMD, OMF, OMG) Des sérums O monovalents Sérums ne contenant qu’un seul type d’Ac : 1,2 / 4,5 / 6,7,8 / 7 / 8 / 9 / 3,10,15 / 10 / 15 / 1,3,19 / 11 / 13,22,23 / 6,14,24.

15 Ag spécifiques des Ac du sérum
Sérum O mélange Ag spécifiques des Ac du sérum Groupes agglutinés OMA 1,2,3,4,5,9,10,12,19,21,46 A,B,D,E,L OMB 6,7,8,11,13,14,20,22,23,24 C,F,G,H OMC 16,17,18,28,30,35,38 I,J,K,L,M,N,O,P OMD 39,40,41,42,43,44,45 Q,R,S,T,U,V,W OMF 47,48,50,51,52,53 X,Y,Z,51,52,53 OMG 60,61,62,63,65,66,67

16 Les Ac anti Ag O monovalents
Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMA ? Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMB ? Ac anti 0 1, 2 pour le groupe A Ac anti 0 4, 5 pour le groupe B Ac anti 0 9 pour le groupe D Ac anti 0 3, 10, 15 pour le groupe E Le groupe le plus fréquent : groupe C à tester avec Ac anti

17 Des sérums H monovalents
3-2- Les Ac anti Ag H Des sérums H mélange Sérum contenant un mélange d’Ac anti Ag H Des sérums H monovalents Sérum ne contenant qu’un seul type d’Ac

18 3-3- Les Ac anti Vi Il n’existe d’un Ag Vi (microcapsule de S. Typhi
S. PARATYPHI C S. Dublin) 18

19 4- La technique du sérogroupage
Voir p 296

20 4-1- Les étapes du sérogroupage
Premières étapes 1- S’assurer que la bactérie est bien une Salmonella 2- Vérifier que la souche n’est pas auto-agglutinable (réalisation d’un témoin de non auto-agglutinabilité en mettant les bactéries en présence d’eau physiologique)

21 Les étapes du sérogroupage (suite)
Étapes suivantes : identification du (ou des) groupe(s) O 3- Identifier les groupes auxquels la bactérie appartient grâce à des sérums mélanges d’Ac anti-O OMA = agglutinines groupes A, B, D, E, L (contient Ag 1, 2, 3, 4, 5, 9, 10, 12, 19, 21, et 46) OMB = agglutinines groupes C, F, G, H (contient Ag 6, 7, 8, 11, 13, 14, 20, 22, 23, 24) Remarque : si pas d’agglutination avec OMA et OMB, il faudra rechercher si la souche possède l’Ag Vi en utilisant des AC anti Vi 4- Préciser l’identification des Ag O en utilisant des sérums Anti O (sérums monovalents) en les choisissant par ordre de fréquence de groupe.

22 Les étapes du sérogroupage (suite)
Dernières étapes : identification du sérogroupe précis par identification des Ag H . 5- Identifier les Ag H parmi ceux possibles (en fonction du résultat de l’identification de l’Ag O) grâce à des Ac anti H (mélange et monovalent). Respecter l’ordre des fréquences de groupe. ATTENTION : nous ne disposons pas au laboratoire de tous les sérums nécessaires… Il faut donc faire au mieux !

23 4-2- Exemple de résultats d’un sérogroupage
La bactérie n’appartient pas au groupe B 1 2 3 4 5 6 Sérum f OMA Anti O4, 5 Anti O 9 Anti H g, m Anti H l, v 7 Anti H 1, 5 Pas d’agglutination avec l’eau physiologique : Les bactéries testées ne sont pas auto-agglutinables, les autres résultats peuvent être interprétés Agglutination avec OMA : les Salmonella appartiennent aux groupes A, B, D, E, L Agglutination avec Anti O9 : les Salmonella appartiennent au groupe D Agglutination avec Anti H1 et H5 les Salmonella sont Salmonella Panama