Sérogroupage des Salmonella

Présentation au sujet: "Sérogroupage des Salmonella"— Transcription de la présentation:

1 Sérogroupage des Salmonella
Réalisation par Christiane JOFFIN

2 POURQUOI ? Obtenir la formule antigénique qui désigne le SÉROVAR, seul moyen de préciser l’identification d’une Salmonella

3 QUE RECHERCHE T’ON ? Ag O de paroi Ag H du flagelle pour les souches mobiles Ag Vi de la micro-capsule

4 1- Les antigènes des Salmonella (et des bactéries Gram négatives)

5 Voir dictionnaire des techniques

6 Voir dictionnaire des techniques

7 2- Le principe du sérogroupage des Salmonella

8 COMMENT ? Par une identification des Ag O, H (et Vi)
Après l’identification biochimique du genre Salmonella Avec une culture pure sur une gélose non sélective (Kligler par exemple) Par une identification des Ag O, H (et Vi) en utilisant des Ac connus par une technique d’agglutination directe sur lame.

9 Principe du sérogroupage
Identifier : d’abord les Ag O de paroi, puis les Ag H de flagelle et éventuellement l’Ag Vi en utilisant des Ac connus spécifiques des Ag O (Ac anti O), des Ag H (Ac anti H) et de l’Ag Vi. Si les bactéries ont des Ag spécifiques des Ac utilisés connus, il va y avoir union Ag / Ac avec formation d’un réseau volumineux visible sous forme d’un agglutinat.

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11 Agglutination des Salmonella par suite réaction
Ag O/ Ac anti O Agglutination des Salmonella par suite d’une réaction Ag H / Ac anti H

12 3- Les réactifs pour le sérogroupage des Salmonella
Voir dictionnaire des techniques

13 Ac fabriqués par des lapins et obtenus en recueillant leur sérum
Origine des Ac : Ac fabriqués par des lapins et obtenus en recueillant leur sérum Prix des sérums : 30 € les 3 mL soit 10 € par mL et € par L (un lingot d’or (1 kg) = €

14 3-1- Les Ac anti Ag O Des sérums O mélange (OMx)
Sérums (contenant un grand nombre d’Ac de sortes différentes) : 6 sérums mélange (Omx : OMA, OMB, OMC, OMD, OMF, OMG) Des sérums O monovalents Sérums ne contenant qu’un seul type d’Ac : 1,2 / 4,5 / 6,7,8 / 7 / 8 / 9 / 3,10,15 / 10 / 15 / 1,3,19 / 11 / 13,22,23 / 6,14,24.

15 Ag spécifiques des Ac du sérum
Sérum O mélange Ag spécifiques des Ac du sérum Groupes agglutinés OMA 1,2,3,4,5,9,10,12,19,21,46 A,B,D,E,L OMB 6,7,8,11,13,14,20,22,23,24 C,F,G,H OMC 16,17,18,28,30,35,38 I,J,K,L,M,N,O,P OMD 39,40,41,42,43,44,45 Q,R,S,T,U,V,W OMF 47,48,50,51,52,53 X,Y,Z,51,52,53 OMG 60,61,62,63,65,66,67

16 Les Ac anti Ag O monovalents
Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMA ? Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMB ? Ac anti 0 1, 2 pour le groupe A Ac anti 0 4, 5 pour le groupe B Ac anti 0 9 pour le groupe D Ac anti 0 3, 10, 15 pour le groupe E Le groupe le plus fréquent : groupe C à tester avec Ac anti

17 Des sérums H monovalents
3-2- Les Ac anti Ag H Des sérums H mélange Sérum contenant un mélange d’Ac anti Ag H Des sérums H monovalents Sérum ne contenant qu’un seul type d’Ac

18 3-3- Les Ac anti Ag Vi Une seule valence Trois sérovars concernés Attention : d’autres Entérobactéries possèdent cet antigène (Klebsiella…)

19 4- La technique du sérogroupage
Voir dictionnaire des techniques

20 4-1- Les étapes du sérogroupage
Premières étapes 1- S’assurer que la bactérie est bien une Salmonella 2- Vérifier que la souche n’est pas auto-agglutinable (réalisation d’un témoin de non auto-agglutinabilité en mettant les bactéries en présence d’eau physiologique)

21 Les étapes du sérogroupage (suite)
Etapes suivantes : identification du (ou des) groupe(s) O 3- Identifier les groupes auxquels la bactérie appartient grâce à des sérums mélanges d’Ac anti-O OMA = agglutinines groupes A, B, D, E, L (contient Ag 1, 2, 3, 4, 5, 9, 10, 12, 19, 21, et 46) OMB = agglutinines groupes C, F, G, H (contient Ag 6, 7, 8, 11, 13, 14, 20, 22, 23, 24) Remarque : si pas d’agglutination avec OMA et OMB, il faudra recherher si la souche a l’Ag Vi en utilisant des AC anti Vi 4- Préciser l’identification des Ag O en utilisant des sérums Anti O (sérums monovalents) en les choisissant par ordre de fréquence de groupe.

22 Les étapes du sérogroupage (suite)
Dernières étapes : identification du sérogroupe précis par identification des Ag H . 5- Identifier SI POSSIBLE les Ag H parmi ceux possibles (en fonction du résultat de l’identification de l’Ag O) grâce à des Ac anti H (mélange et monovalent). Respecter l’ordre des fréquences de groupe.

23 4-2- Exemple de résultats d’un sérogroupage
La bactérie n’appartient pas au groupe B 1 2 3 4 5 6 Sérum f OMA Anti O4, 5 Anti O 9 Anti H g, m Anti H l, v 7 Anti H 1, 5 Pas d’agglutination avec l’eau physiologique : Les bactéries testées ne sont pas auto-agglutinables, les autres résultats peuvent être interprétés Agglutination avec OMA : les Salmonella appartiennent aux groupes A, B, D, E, L Agglutination avec Anti O9 : les Salmonella appartiennent au groupe D Agglutination avec Anti H1 et H5 les Salmonella sont Salmonella Panama