Le laboratoire de Microbiologie

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1 Le laboratoire de Microbiologie
Mr Civel – ABM1 / Microbiologie Le laboratoire de Microbiologie

2 Aspects réglementaires
Les établissements d’enseignement entrent dans le champ d’application du Code du travail. Évaluation des risques par le classement des agents biologiques en 4 groupes en fonction du risque infectieux . Etablissement de mesures adaptées pour la protection collective et individuelle : les mesures vont conditionner le degré de confinement, c’est-à-dire la conception du laboratoire de bactériologie, et vont influencer l’organisation du poste de travail. Etablissement de procédures adaptées : elles constituent les consignes de sécurité.

3 Les agents biologiques et leur classement
Classe de risque Risque pour le manipulateur Risque pour la population Pouvoir pathogène reconnu Traitement et/ou moyen efficace de prévention Exemples d’agents 1 Faible Aucun Inutile - Saccharomyces cerevisiae (levure de boulangerie) - Bactéries lactiques (Yaourt) - Penicillium roqueforti - Escherichia coli K12 2 Modéré + - Escherichia coli UPEC - Staphylococcus aureus - Listeria monocytogenes - Cytomégalovirus 3 Élevé ++/+++ - Mycobacterium tuberculosis - VIH, VHB, Prions - Yersinia pestis 4 +++ - Agents des fièvres hémorragiques : virus Ebola, virus de Lassa - Virus de la variole

4 Mesures de confinement des laboratoires
MESURES DE CONFINEMENT A METTRE EN ŒUVRE DANS LES LABORATOIRES DE RECHERCHE, DE DÉVELOPPEMENT ET D'ENSEIGNEMENT NIVEAUX DE CONFINEMENT 2 3 4  A Conception du laboratoire 1. Signalisation du laboratoire (pictogramme " danger biologique "). Oui 2. Laboratoire séparé des autres locaux au moins par une porte. 3. Accès au laboratoire via un sas * (oui si pression négative) Non Optionnel * 4. Accès réglementé et verrouillable. - Accès possible pour les seuls travailleurs autorisés. Oui par sas 5. Possibilité de fermer hermétiquement le lieu de travail pour permettre la désinfection. Optionnel 6. Filtration de l’air extrait du lieu de travail (filtre HEPA) avec évacuation de l'air à l'extérieur. 7. Filtration de l'air entrant dans le lieu de travail. 8. Présence d'une fenêtre d'observation ou d'un système équivalent permettant de voir les occupants. 9. Moyen de communication avec l'extérieur. 10. Maintien d'une pression négative dans le laboratoire par rapport aux zones voisines. Oui (1) 11. Système d'alarme pour détecter tout changement inacceptable de la pression de l'air. 12 Approvisionnement en énergie électrique de secours. 13. Système de ventilation de secours. B Aménagements internes Conception et équipement du laboratoire de microbiologie (Mesures de confinement) * Oui : exigence. Non : pas d’exigence. Optionnel : doit être décidé, au cas par cas

5 Mesures de confinement des laboratoires
MESURES DE CONFINEMENT A METTRE EN ŒUVRE DANS LES LABORATOIRES DE RECHERCHE, DE DÉVELOPPEMENT ET D'ENSEIGNEMENT NIVEAUX DE CONFINEMENT 2 3 4  A Conception du laboratoire B Aménagements internes 1. Poste de sécurité microbiologique. Oui (2) Oui, type III 2. Vêtements de protection. Oui Oui adaptés 3. Aménagements pour le rangement des vêtements de protection dans le laboratoire ou l'unité. 4. Douche pour la décontamination des travailleurs. Non Optionnel 5. Lavage des mains : lavabos dont les robinets peuvent être manœuvrés sans utiliser les mains. Oui (3) 6. Résistance des surfaces à l'eau, nettoyage aisé sans endroits inaccessibles au nettoyage. Oui (sols) 7. Surfaces des paillasses imperméables à l'eau, résistantes aux acides, alcalis, solvants et désinfectants. 8. Lutte efficace contre les vecteurs, par exemple rongeurs et insectes. 9. Présence d'un autoclave * facilement accessible Oui* Oui dans le labo 10. Présence dans le laboratoire d'un équipement de base spécifique (matériel marqué) C Pratiques opératoires Conception et équipement du laboratoire de microbiologie (Mesures de confinement) * Oui : exigence. Non : pas d’exigence. Optionnel : doit être décidé, au cas par cas

6 Mesures de confinement des laboratoires
MESURES DE CONFINEMENT A METTRE EN ŒUVRE DANS LES LABORATOIRES DE RECHERCHE, DE DÉVELOPPEMENT ET D'ENSEIGNEMENT NIVEAUX DE CONFINEMENT 2 3 4  A Conception du laboratoire B Aménagements internes C Pratiques opératoires 1. Stockage des agents biologiques en lieu sûr. Oui Oui lieu protégé 2. Manipulation des matières infectées et de tout animal contaminé dans un système approprié de confinement (5) Optionnel 3. Utilisation de conteneurs spécifiques pour aiguilles contaminées, objets piquants ou tranchants souillés. 4. Minimisation de la formation d'aérosols. 5. Contrôle de la dissémination des aérosols formés. Minimiser Empêcher 6. Gants 7. Inactivation du matériel contaminé et des déchets. 8. Sortie du laboratoire après décontamination des équipements susceptibles d'être contaminés (centrifugeuses. PSM...). 9. Inactivation des effluents des éviers et des douches. Non Conception et équipement du laboratoire de microbiologie (Mesures de confinement) * Oui : exigence. Non : pas d’exigence. Optionnel : doit être décidé, au cas par cas

7 Pictogrammes De Sécurité
Risques biologiques

8 Pictogrammes De Sécurité

9 Exemple de phrases de risque : Exemple de phrases de sécurité :
R1 Explosif à l'état sec. R2 Risque d'explosion par le choc, la friction, le feu ou d'autres sources d'ignition. R5 Danger d'explosion sous l'action de la chaleur. R10 Inflammable. R12 Extrêmement inflammable. R68 Possibilité d'effets irréversibles R39/26/27/28 Très toxique : danger d'effets irréversibles très graves par inhalation, par contact avec la peau et par ingestion. … Exemple de phrases de sécurité : S1 Conserver sous clé. S2 Conserver hors de la portée des enfants S3 Conserver dans un endroit frais S4 Conserver à l'écart de tout local d'habitation S8 Conserver le récipient à l'abri de l'humidité. S9 Conserver le récipient dans un endroit bien ventilé S64 En cas d'ingestion, rincer la bouche avec de l'eau ( seulement si la personne est consciente ). S36/39 Porter un vêtement de protection approprié et un appareil de protection des yeux / du visage. …

10 Geste sécurité - Prévention
Les risques au laboratoire de Microbiologie Matériel utilisé Nature du risque Geste sécurité - Prévention Le bec électrique BRULURES Port d'une blouse non inflammable. Cheveux courts ou attachés. Vigilance. Ne pas approcher un produit inflammable Verres (lame, pipette) COUPURES Port de gants. Vigilance. Pipettes Pasteur : stériles contaminées PIQURES Les poser sur leur support. Ne pas laisser de fragments sur la paillasse. Les jeter immédiatement après usage dans le bac de Javel. Matériel électrique ELECTROCUTION Sols et paillasses secs. Ne pas toucher une prise ou une fiche d'appareil avec les mains mouillées. Signaler au professeur tout appareil abîmé (fil dénudé). Produits chimiques INHALATION Maintenir les flacons fermés. Ne pas respirer au-dessus d'un flacon ouvert. INGESTION Ne jamais prélever à la bouche. Utiliser une poire aspirante ou une pipette automatique. PROJECTIONS Utiliser une blouse, des gants, des lunettes et travailler sous hotte. COMBUSTION Ne pas manipuler les produits inflammables à proximité d'une flamme ou d'une source d'étincelles ou de chaleur. Micro-organismes Port de masque. Manipulation de souches dangereuses sous la hotte. Utilisation de poires aspirantes, de système d'aspiration Ne pas porter les mains à la bouche. Eviter les courants d'air. Flamber l'oese progressivement (boucle en dernier !!!) Ne pas porter de lentilles.

11 Les règles fondamentales de la manipulation microbiologique
Ne pas contaminer les réactifs et milieux de culture Sinon risque d'erreur technique Ne pas contaminer l’environnement ou les personnes Sinon risque biologique

12 Le matériel de laboratoire L’organisation du poste microbiologique
La manipulation aseptique (entrée du laboratoire, en cours de manipulation, sortie du laboratoire)

13 1. Pipette Pasteur 2. Anse ou oese 3. Fil droit 4. Pince
Le matériel de laboratoire 1. Pipette Pasteur 2. Anse ou oese 3. Fil droit 4. Pince 5. Verre à pied Le matériel de laboratoire

14 Le matériel de laboratoire
7. Bac à pipettes* 8. Bec Hoffmann (électrique) 9. Portoirs Le matériel de laboratoire

15 Le matériel de laboratoire
11. Lamelle et lame 4. 10. Pissette d’eau (ou autre) 13. Porte lame (et bac à coloration, ici remplacé par l’évier) 12. Colorants Violet de Gentiane, Lugol, Fuschine et décolorant (alcool) Le matériel de laboratoire

16 Le microscope optique Le matériel de laboratoire 1. Objectifs
7. potence 2. Objectifs 8. revolver 3. Porte Lame 9. Vis Macrométrique 4. Platine 10. Vis Micrométrique 11. Source lumineuse 5. Condenseur 6. Diaphragme 12. Pied Le microscope optique

17 Le microscope optique

18 Papier doux sous l’objectif X100
Utilisation du microscope optique, aux laboratoires du lycée Paul Eluard de Saint-Denis Housse Papier doux sous l’objectif X100 Microscope débranché

19 L’organisation du poste de travail

20 L’organisation du poste de travail
A droite : Pot à instruments propres : .…… ……..………… ..…………………… …………….. ……………….. A gauche : Milieux et tubes de culture ………………..… de la source de chaleur ! Bac à colorants Position du technicien manipulant dans la zone stérile qui doit être ……………. et disposée au milieu de la paillasse Microscope, stylos et documents ………. de la zone de manipulation Fils électriques au ……….……. de la paillasse A droite : Bac à Javel pour pipettes contaminées dépo-sées ……………..……….….. Bec Hoffmann Manchon électrique

21 Pendant la manipulation :
En entrant : Tenue appropriés et organiser son poste Pendant la manipulation : Attitude réfléchie et comportement adapté + utilisation de matériel stérile En fin de manipulation : Rangement et nettoyage + désinfection La manipulation aseptique Procédures au laboratoire de microbiologie

22 Mise en place de Procédures
Procédure de nettoyage de la paillasse Gestion des déchets Procédure de nettoyage des mains Conduite à tenir en cas d’accident

23 Nettoyage de la paillasse
Nettoyage-désinfection avec de l’anios, en fin de manipulation (adaptation de la procédure) 2. En cas de désinfection après une contamination : Délimitation Temps d’action Essuyage Procédures au laboratoire de microbiologie

24 Gestion des déchets Procédures au laboratoire de microbiologie
Déchets non piquants-coupants : Tubes à Hémolyse en verre Boites de pétri Ampoules API Papiers contaminés Ecouvillons Plaques en carton de sérogroupage Parafilm Gants latex Spatules d’étirement Tubes eppendorf Unopettes recapuchonnées Tubes plastiques Tubes de sang Déchets piquants-coupants : Pipettes pasteur Pipettes plastiques Cure-dents Agitateur Tubes hématocrite Crochets de verre Débris de verre Cônes des micropipettes Bac à pipette Bac à lames Poubelles de salle destinées à l’autoclavage D’après la procédure M002, JN. Joffin Grands tubes de culture Lames Lamelles

25 1 - Après avoir retroussé les manches, mouiller les mains
Lavage des Mains 1 - Après avoir retroussé les manches, mouiller les mains 2 - Recueillir une dose de savon liquide 3 - Se savonner 30 secondes environ en insistant sur les espaces interdigitaux, le dos des mains et les poignets 4 - Rincer abondamment 5 - Essuyer les mains avec un essuie-mains jetable 6 - Fermer le robinet avec l'essuie-mains qui est éliminé dans une poubelle ouverte ou à commande à pédale Procédures au laboratoire de microbiologie

26 Le laboratoire de Microbiologie
Promotion 2009 Le laboratoire de Microbiologie