LA PROTEINE FLUORESCENTE GAETAN FABRICE FLORENT QUENTIN ET JULIEN CE QU’ON A FAIT : ON A PRODUIT DES BACTERIES ET PURIFIE DES PROTEINES. ON A MIS EN ETUVE.

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1 LA PROTEINE FLUORESCENTE GAETAN FABRICE FLORENT QUENTIN ET JULIEN CE QU’ON A FAIT : ON A PRODUIT DES BACTERIES ET PURIFIE DES PROTEINES. ON A MIS EN ETUVE 2 FLASQUES : L’une contenant des bactéries transformées (introduction de plasmides portant la séquence codante de la GFP), l’autre contenant des bactéries non transformées.

2 Ensuite dans ces flasques on a introduit de l’ IPTG (sert a induire la production de protéines) et on a fait une cinétique d’apparition de la GFP dans les bactéries: Rangée de culots de bactéries NON TRANSFORMEES Rangée de culots de bactéries TRANSFORMEES (avec protéines fluorescentes)‏ à différents temps

3 CINETIQUE: On a cultivé les 2 flasques et on a pris des échantillons de ces 2 flasques tous les ¼ d’heures pendant 1h puis à 1h30, 2h et,3h. On voit grâce à la fluorescence que la protéine est produite à partir de 1h30. En effet, il faut laisser le temps à la bactérie de produire la protéine fluorescente.

4 Ensuite on a cherché à isoler cette protéine donc on a fait une purification: -Avec des billes qui attirent les protéines hydrophobes. -On a versé sur les billes le contenu du tube avec les protéines en suspension des cultures bactériennes (débarrassé des débris bactériens)‏ Contrôle (protéines issues des bactéries non transformées)‏ Protéines fluo accrochées aux billes Observation au microscope X400

5 MM Vérification de la pureté de la protéine fluorescente par electrophorèse en gel d’acrylamide Toutes les protéines de la culture bactérienne Toutes les protéines non retenues par les billes Notre protéine d’intérêt fluorescente L’étape de purification ne nous a pas permis d’isoler la protéine