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Dans la vie d’un biologiste
Biologie moléculaire Dans la vie d’un biologiste
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Cas clinique hépatite C
Mr X , 47 ans,effectue bilan préopératoire Le bilan biologique montre: NFS normale ALAT , ASAT: 2 x la normale AgHBs – Anti-HBs:+ Sérologie hépatite C positive
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Examens complémentaires à pratiquer
ARN Génotypage Sérotypage viral Charge virale hépatite C Électrophorèse des protéines Bêta 2 microglobuline Bilirubine
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Examens complémentaires
ARN: Témoin de la réplication: 20% hep C sont ARN négatif Plus sensible que la charge virale: Amplicor: 50UI CV amplicor: 600 à UI bDNA: 615 à UI Mais PCR en temps réel sensibilité: 15UI
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Examens complémentaires
Sérotypage ou génotypage: idem , indispensable pour mise sous traitement Sérotypage ne donne pas sous type (1,2….) Mais pas d’influence sur le traitement Génotypage est plus précis Traitement et suivi sont conditionnés par le génotype
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Examens complémentaires à pratiquer
Charge virale hépatite C ARN Génotypage Sérotypage viral Électrophorèse des protéines Bêta 2 microglobuline Bilirubine
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Génotypage se fait par:
Séquençage région NS3 Séquençage région NS5 INNO LIPA PCR en temps réel
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Génotypage Région 5’ NC le plus fréquent , quelquefois pas sous-typage
NS5: plus de variabilité INNO LIPA: Bonne technique, facile PCR en temps réel: avenir!!!!!!!!!
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Génotypage se fait: Séquençage NS3 Séquençage NS5 INNO LIPA
PCR en temps réel
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Décision médicale: Mise sous traitement
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Avant traitement Charge virale
Détection de mutations de résistance au traitement par séquençage
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Avant traitement Charge virale: Recherche de mutations de résistance:
Indiquée pour génotypes 1,4,5 Pas nécessaire pour génotypes 2 et 3 Recherche de mutations de résistance: - Pas de nouvelles molécules : antiprotéases???
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Avant traitement Charge virale
Détection de mutations de résistance au traitement par séquençage
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Suivi pendant traitement
ARN mensuel Charge virale hebdomadaire Transaminases hebdomadaires ARN à M6 NFS mensuelle Hormones thyroïdiennes
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Suivi pendant traitement
Génotype 1: charge virale à S12 (consensus 2002) ou à S4 (2006) Génotypes 2 et 3: ARN à M6 Transaminases tous les mois NFS tous les mois Hormones thyroïdiennes: TSH tous les 3 mois
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Suivi pendant traitement
ARN mensuel Charge virale hebdomadaire Transaminases hebdomadaires ARN à M6 NFS mensuelle Hormones thyroïdiennes
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Suivi post traitement ARN mensuel Charge virale bi-annuelle
ARN à M6 puis 1 an Génotypage Séquençage pour mutations de résistance
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Suivi post traitement ARN mensuel Charge virale bi-annuelle
ARN à M6 puis 1 an Génotypage Séquençage pour mutations de résistance
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Hépatite B Mr C , origine asiatique , arrivé en France depuis 6 mois consulte en gastro-entérologie HAV totaux pos HAV IgM: neg Ag HBs pos Anti-HBc pos avec IgM neg Ag HBe neg Anti-HBe pos Hépatite C neg
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Examens complémentaires à demander
ADN B Sérologie hépatite delta ADN delta Génotypage Hépatite B Anti-HBs
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Examens complémentaires à demander
ADN B : indispensable Facteur de gravité : hépatite delta 5% AgHBs sont infectés par delta Virus delta: pas de technique commerciale mais techniques de RT-PCR maison et maintenant PCR en temps réel Génotypage ???
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Examens complémentaires à demander
ADN B Sérologie hépatite delta ADN delta Génotypage Hépatite B Anti-HBs
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ADN B bDNA PCR classique PCR en temps réel TMA bDNA détecte 25 UI/L
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Techniques ADN b bDNA Amplicor PCR temps réel
linéarité : 615 à 7,7 millions UI/ml Amplicor Linéarité: fonction de la dilution (galère!!!!!!!!) Sensibilité: 200UI/ml PCR temps réel Linéarité : millions UI/ml 12 – 50 millions UI/ml Sensibilité : 12 UI/ml soit 70 copies/ml
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ADN B bDNA PCR classique PCR en temps réel TMA bDNA détecte 25 ui
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Décision thérapeutique
Patient est mis sous Lamivudine avec une charge virale à 8800 UI/ml
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Suivi Médical sous traitement
ADN B mensuel NFS hebdomadaire Charge virale hépatite delta AgHBs mensuel
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Suivi Médical sous traitement
ADN B trimestriel ALAT trimestrielle Si négativation de l’ADN, faire un AgHbS La négativation de l’ag HBs est rare sous lamivudine , 5 à 10% sous interféron
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Suivi Médical sous traitement
ADN B mensuel NFS hebdomadaire Charge virale hépatite delta AgHBs mensuel
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Au bout de 6 mois , la charge virale par bDNA est < 350UI/ml
Après 2 ans de traitement , la charge virale est de UI/ml
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Quels examens doit on pratiquer?
Génotypage Charge virale hépatite delta Ag Hbe Recherche mutant C/préC Recherche mutation YMDD
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Traitements Interféron + peg –interféron Analogues nucléosidiques:
Lamivudine :3TC Emtricitabine: Emtriva Adefovir: Hepsera Tenofovir: Viread clevudine entecavir
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Incidence des résistances
Lamivudine: 24% en 1 an % en 4 ans Adefovir 15% en 4 ans ceci en monothérapie Intérêt des bi ou trithérapies????
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Incidence des résistances
mutation YMDD : la + fréquente , mutation de résistance à la lamivudine, emtricitabine Pas de résistance croisée entre les différents nucléosidiques et nucléotidiques
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spacer Pol/RT RNaseH 1 183 349 (rt1) 692 (rt344) 845 a.a. I(G) II(F) A
Terminal protein spacer Pol/RT RNaseH 1 183 349 (rt1) 692 (rt344) 845 a.a. GVGLSPFLLA YMDD I(G) II(F) A B C D E L180M LAM L801 M204V/I/S V173L ADV A181V N236T I169T ETV M250V S184G M202I LdT M204I TDF V1911I A194T
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Quels examens doit on pratiquer
Génotypage Charge virale hépatite delta Ag HBe Recherche mutant C/préC Recherche mutation YMDD
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Recherche de résistance à la Lamivudine
Séquençage Hybridation moléculaire PCR en temps réel Phénotypage antivirogramme
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Recherche de résistance à Lamivudine
Séquençage Hybridation moléculaire PCR en temps réel Phénotypage antivirogramme
