ANALYSE CLONALE SOMATIQUE

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1 ANALYSE CLONALE SOMATIQUE
Définition d’un clone: groupe de cellules de même génotype (issu d’un même fondateur), au sein d’un individu de génotype différent. (par ex.: -/- au sein de +/-) Pour quoi faire? - analyse de mutations récessives létales. - génération de tissus mosaïque. - test d’autonomie cellulaire. Conditions: - induire des crossing-over dans des cellules en mitose. - pouvoir marquer le clone.

2 + m + m + + m m Génotype: + / m + m

3 Recombinaison mitotique +
Phénotype + + m + + m m + + m + + + + + m m m m m

4 Analyse clonale somatique : SYSTEME FRT-FLP
Sites FRT flp Recombinaison site spécifique + m flp Génotype: + / m ; HS-FLP / +

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6 Marquage des clones + m + m Clones jumeaux (« twin-spot » + + + + m m
Choc thermique + flp + UB-GFP + + m m m m Génotype: + , UB-GFP , FRT / m , + , FRT ; HS-FLP / + m + Choc thermique + flp + + + m m m m myc-tag Génotype: + , FRT / m , mycTag , FRT ; HS-FLP / + m Clones jumeaux (« twin-spot »

7 Marquage des clones : négatif (GFP)
+ Choc thermique + flp + UB-GFP + + m m m m Génotype: + , UB-GFP , FRT / m , + , FRT ; HS-FLP / + m Prolifération Clones jumeaux (« twin-spot ») Clones jumeaux (« twin-spot »

8 Twin-spots Clones jumeaux (« twin-spot ») Prolifération, croissance
HS-FLP ; FRT rasc40b mycTag / FRT , +, + ; en-GAL4, UAS-P35

9 + m Marquage des clones : positif (GFP) Système MARCM + + m m m m flp
Promoteur HS flp répresseur + + répresseur + m m UAS-GFP m m m UAS-GFP GAL80 GAL4 Promoteur Ubiquitaire Génotype: + , UB-GAL80 , FRT / m , + , UAS-GFP , FRT ; UB-GAL4 , HS-FLP / +

10 m m + z z maternel zygotique Activation du génome zygotique 1 2 3

11 L ’ovocyte se développe dans un cyste

12 CLONES GERMINAUX : technique « FLP-DFS »
Phénotype Fs flp + Fs + Fs + m Fs + + m Fs + + m + Fs m Génotype: Fs , + , FRT / + , m , FRT ; HS-FLP / + Fs flp + Fs Fs + Fs + Fs + + m m + m + m + m

13 p-actine GAL4 p-actine GAL4 GFP gène X UAS UAS yellow Promoteur HSP 70
FRT p-actine GAL4 GFP gène X p-actine FRT yellow GAL4 UAS UAS Promoteur HSP 70

14 ELEMENTS TRANSPOSABLES : P

15 + TRANSFORMATION : LIGNEES TRANSGENIQUES transposase transposase rosy
white G418 LacZ GAL4 UAS Gène X ......

16 APPLICATIONS ET TYPES D'ELEMENTS P
- vecteurs d'expression (gène X; lacZ; GAL4; GFP; FRT; Flipase;...) - pièges ("enhancer-trap"; "gene-trap" ; "protein-trap") - rapporteur (UAS;) - mutagène

17 Vecteur d'expression gène X; lacZ.... promoteur

18 ENHANCER-TRAP ENHANCER LacZ Promoteur minimal

19 "PROTEIN-TRAP" SD SA GFP

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21 GAL4 tissu-spécifique "GENE-TRAP" DEREGULATION phénotype GAL4 Gène X
UAS (5X) Gène X phénotype

22 WT en-GAL4 sans effet Régulateur positif Régulateur négatif

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25 TRACAGE DES CELLULES

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27 Cycle rétroviral

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29 GENES RAPORTEURS P7 Nicolas, J.F. et al. Development : Eloy-Trinquet, S. et al Curr Top Dev Biol :33-80

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