Lambda Zap.

Présentation au sujet: "Lambda Zap."— Transcription de la présentation:

1 Lambda Zap

2 Cosmids

3 La sonde ‘a’ identifie les clones 1 et 2 Une sonde faite à partir de la séquence le plus 3’ du clone 2 va identifier les clones 3 et 4

4 Les sondes ( probes) Une sonde est une séquence d’ADN ou d’ARN qui peut hybrider avec une séquence complémentaire Cible: 5’ AATTCGTATCGATCGTAGATTTACAT 3’ Sonde: 3’ TTAAGCATAGCTAGCATCTAAATGTA 5’ Il faut que l’ADN cible et la sonde soit dénaturer-simple brin-pour que la sonde puisse se fixer ( donc traitement avec la soude ou chauffé à 95°C pour l’ADN) Fabrication des sondes d’ADN: -Random priming -Transcriptase Inverse -Kinase

5 Les sondes et l’hybridation
Sondes radioactives: p32: B radiation-nucléotide avec le phosphate radioactif sur le alpha, beta ou gamma phosphate.

6 Hybridation des acides nucléiques
Le stringence: Les conditions d’hybridation et en particulier la concentration de sel et le température. Augmente la concentration de selréduire la stringence Augmente la températureaugmente la stringence Sonde souris+banque souris-utilise une stringence forte car les séquences sont identiques Sonde souris+banque mouche-stringence moins forte car les séquences ont divergé pendant évolution. Conditions souvent employées: 0,8M NaCl/citrate, 65°C Formamide: en présence de formamide on réduit la température d’hybridation37°C . Le temps d’une hybridation est variable: souvent la nuit Il faut laver les filtres après l’hybridation: variable selon l’expérience

7 Sondes froides Digoxigenin: une stéroïde isolé des plantes Liaison covalent avec un nucléotide: incorporé dans une sonde comme les nucléotides normales. Détection avec des anticorps Utilisé le plus souvent dans les sondes ARN