L’analyse d’ADN et la génomique

Présentation au sujet: "L’analyse d’ADN et la génomique"— Transcription de la présentation:

1 L’analyse d’ADN et la génomique
Page 21 Techniques de préparation d’échantillons homogènes d’ADN (copies) / ok Clonage d’un gène Celui-ci varie-t-il d’une personne à l’autre? Certains de ses allèles sont-ils liés à une maladie héréditaire? Où et quand est-il exprimé dans l’organisme? Quel est son emplacement dans le génome? Evolution COMMENT ?

2 Génomique CONNAÎTRE séquence nucléotidique du gène
Page 21 CONNAÎTRE séquence nucléotidique du gène Individus même espèce Espèces différentes CONNAÎTRE séquence du génome Ensemble de gènes Interactions

3 PCR A la fin: Séparer les fragments d’ADN amplifiés → amplicons
Electrophorèse (gel d’agarose) Comment ?

4 Electrophorèse

5 Electrophorèse sur gel
Page 21 Principe Séparer des macromolécules (acides nucléiques ou protéines) en fonction de leur taille et de leur charge électrique.

6 Electrophorèse sur gel
Page 21 Déroulement (3 étapes) Etape n°1

7 Electrophorèse sur gel
Page 21 Déroulement (3 étapes) Etape n°2

8 Electrophorèse sur gel
Page 21 Déroulement (3 étapes) Etape n°3

9 Electrophorèse (résultat)
Le bromure d'éthidium (BEt ou EtBr)

10 Electrophorèse sur gel
Applications Analyser l’ADN après une PCR Estimer le poids moléculaire de fragments d’ADN après une digestion (enzyme de restriction) Séparer des fragments d’ADN avant un Southern blot

11 Analyse des fragments de restriction (variations)
Page 22 Idée Détecter indirectement certaines différences de séquences nucléotidiques au niveau de l’ADN.

12 Analyse des fragments de restriction (variations)
Page 22 Principe Trier des fragments d’ADN (taille) résultant du découpage d’une longue molécule d’ADN par une enzyme de restriction.

13 Analyse des fragments de restriction (variations)
Page 22 Déroulement Echantillons de gènes clonés et purifiés

14 Analyse des fragments de restriction (variations)
Page 22 Déroulement

15 Analyse des fragments de restriction (variations)
Page 22 Déroulement

16 Analyse des fragments de restriction (variations)
Page 23 Possibilité d’effectuer le même genre de comparaison sans effectuer de clonage génique Génome entier En combinant l’électrophorèse sur gel et l’hybridation des acides nucléiques

17 Buvardage de Southern Page 23

18 Etape n°1 (enzyme de restriction)
Page 23

19 Etape n°2 (électrophorèse)
Page 23

20 Etape n°3 (Southern) Page 23

21 Etape n°4 (hybridation)
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22 Etape n°5 (autoradiagraphie)
Page 23

23 Buvardage de Southern Applications Localiser une séquence d’ADN
Page 23 Applications Localiser une séquence d’ADN Etudier l’ADN non codant (majeure partie du génome des Animaux et des Végétaux) Existe-t-il entre les séquences non codantes des différences analogues à celles qui existent entre les allèles des gènes?

24 Etude de l’ADN non codant
Page 23 OUI, de nombreuses différences existent. Les séquences d’ADN des chromosomes homologues présentent des variantes. Ces variations = polymorphismes de taille des fragments de restriction ou PTFR Très abondants

25 Carte génétique