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Stérilisation 1) DÉFINITION:

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1 Stérilisation 1) DÉFINITION:
La stérilisation est une opération qui a pour but de priver un objet ou un produit des microorganismes vivants qui le souillent

2 Ce qui doit être stérile en pharmacie:
- préparations injectables - collyres - matériel chirurgical - pansements - champs opératoires - fils à ligatures - matériel d’injection (seringue, aiguille, cathéter …) - pommades stériles (brûlés …)

3 PRINCIPE DE LA STÉRILISATION
Destruction des microorganismes vivants Chaleur, irradiation, chimie Rétention des microorganismes vivants Filtration (liquides ou gaz)

4 2) STÉRILISATION PAR LA CHALEUR:
2 - 1) Facteurs utiles a) température et durée Formes végétatives des bactéries: en milieu aqueux: T > 56°C durée 5 à 60 minutes Formes sporulées: T = 100°C durée = plusieurs heures T = 110°C durée = plusieurs dizaines de minutes T = 120°C durée = plusieurs minutes

5 La destruction des germes par la chaleur est une opération logarithmique dont le résultat est une probabilité liée à T° et durée Nombre de germes [G] T° = 121°C (standard Pharmacopée) dG/dT = - K G Probabilité 99,9999 % détruit Durée (mn)

6 c) contamination initiale
Nombre de germes [G] N x 10 dG/dT = - K G N Probabilité 99,9999 % T T2 Durée (mn)

7 Conditions à respecter:
- matériel de préparation propre - matières premières propres - procédures rigoureuses - personnel qualifié et entraîné régulièrement

8 d) Humidité Bactéries: résistantes en milieu sec fragiles en milieu humide Exemple: destruction des spores du charbon: 3 heures à T = 150°C en milieu sec 45 minutes à T = 121°C en milieu humide

9 3) MÉTHODES DE STÉRILISATION PAR CHALEUR SÈCHE
3 - 1) Flambage Flamme du bec Bunsen en microbiologie

10 3 - 2) Four à air chaud Poupinel et Pasteur
T° > 150°C pendant 45 ’ à 1 heure petit matériel et pansements hospitaliers en conteneur alu 3 - 3) Four tunnel (industrie) T° > 250°C pendant quelques minutes verrerie injectable (stérilisation poussée) (destruction des résidus bactériens inertes)

11 Autoclave: 4) MÉTHODE DE STÉRILISATION À CHALEUR HUMIDE
Effectué dans un autoclave avec de l'eau à ébullition Autoclave: Enceinte à volume constant isolée de la pression atmosphérique La température d'ébullition de l'eau augmente au dessus de 100°C par augmentation de la pression atmosphérique dans l'enceinte pression température maximale de l'eau 0 atm 100°C 0,5 atm 110°C 1,0 atm 121°C Standard Pharmacopée Européenne : T = 121°C pendant 15 minutes

12 manomètre purge couvercle corps paniers Résistance immergée dans l’eau

13 6 ) ANTISEPTIQUES 6 - 1 ) Antiseptiques liquides : a) ADDITION = Conservateurs Usage : préparation liquide à usage multiple Collyres, solution buvable, lotions, pommades Exemple: Ethanol à 20% (potions adultes) Ammonium quaternaires ( collyres < 2%o ) Parabènes ( pommades, solution buvable < 4%o ) Saccharose > 50% ( sirop ) Sorbate de potassium ( solution buvable ) Usage réglementé et restrictif

14 b) STERILISATION : Matériel : Hypochlorite de soude Solution de peroxyde d'hydrogène à 2% (H2O2) Surface cutanée : Solution iodée (betadine) Ammonium quaternaire (chlorure de benzalkonium) Organomercuriels ( mercurescéine sodique) Alcool à 70 %

15 6 - 2 ) Antiseptiques gazeux :
Matériel et locaux Qualités requises: - activité sur spores, bactéries, levures et virus activité à température peu élevée bonne diffusion inertie chimique - inocuité

16 a ) Formol H - C - HO Facile à produire depuis le trioxyméthylène cristallisé par chauffage à 50°C actif sur tous germes Utilisé pour les locaux (24 h de contact puis ventilation forte)

17 b) acide peracétique : Solution à 30 % utilisée par vaporisation ou aerosolisation Promoteur d 'oxygène natif. Utilisé pour les locaux et chambres d'hôpital

18 d) Oxyde d'éthylène (epoxyéthane)
gaz incolore, Teb = +10.7°C explosif de 3 à 80% dans l'air agent alkylant pénétrant stérilise à travers un conditionnement papier actif sur tous germes Seringues à usage unique, gants de chirurgien ...

19 7) RADIOSTERILISATION 7 - 1 ) Types de radiations Bêta : électrons accélérés produit par un accélérateur électrostatique Gamma : onde électromagnétique produit par un isotope radioactif ( Co 60 ) UV : Rayonnement ultraviolet produit par tube quartz à vapeur de mercure

20 Mode d'action des radiations ionisantes
A) Fracture des molécules d'ADN, ARN … B) formation de radicaux libres oxydants H° : peu efficaces OH° : extrêmement puissants

21 7 - 2 ) Pouvoir pénétrant UV : selon la longueur d'onde > Å pénétrant mais inactif > Å qq cm d'eau pure et actif < Å qq m d'air sec et très actif Utilisé comme entretien de stérilité des salles stériles

22 Bêta : traverse plusieurs dizaine de cm de matière solide Gamma : traverse le double du rayonnement Bêta Utilisé tous deux pour la stérilisation de petit matériel et de matières premières en poudre sèche

23 7 - 4 ) Application : UV Des tubes quartz à vapeur de mercure sont placés dans les salles à maintenir stériles. Ces tubes doivent être éteint en présence de personnel (atteinte rétinienne)

24 Bêta: Accélérateur électrostatique Carton Tapis roulant

25 Gamma : Caisse sur Palette, sur tapis roulant Électrode en Co 60
Sol de la salle blindée Piscine

26 Produits radio-stérilisés :
matériel chirurgical sondes seringues à usage unique pansements matières premières végétales ou en poudre

27 8) Filtration stérilisante
La stérilisation par filtration adopte l’utilisation de filtre écran Solution stérile Solution biochargée ouverture <= 0.22µm membranes: - acétate de cellulose - polyvinylidiène - PTFE - polyamide

28 Filtration stérilisante
Utilisable que pour les fluides: gaz, liquide Pores du filtre : maximum µm Test de d’efficacité : Pseudomonas Diminuta Contrôle d’intégrité : Test de surpression Ce test est fait après la filtration Pour vérifier que le filtre est inaltéré

29 Conditions initiales de la filtration stérilisante:
Matériel lavé et stérilisé Environnement classé à moins de 3500 particules / m3 Et préalablement stérilisé (Salle blanche) Opérateur vêtu de scaphandre ou tenue appropriée Solution à filtrer avec moins de 10 germes /100 ml < 10 CFU / 100 ml

30 Conditions finales de la filtration stérilisante:
La solution doit être recueillie aseptiquement Conditionnement lavé et stérilisé Bouchage immédiat après répartition dans le conditionnement

31 Azote comprimé solution vrac non stérile Filtre 0,22 µm environnement aseptique matériel préalablement stérilisé

32 8 ) Contrôle de la stérilité
Boite de Petri + gélose solide et ensemencement Tube gélosé liquide et ensemencement profond Le contrôle est effectué sur 7 et 14 jours pour les bactéries Le contrôle est effectué sur 28 jours pour les levures


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