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Stérilisation 1) DÉFINITION:
La stérilisation est une opération qui a pour but de priver un objet ou un produit des microorganismes vivants qui le souillent
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Ce qui doit être stérile en pharmacie:
- préparations injectables - collyres - matériel chirurgical - pansements - champs opératoires - fils à ligatures - matériel d’injection (seringue, aiguille, cathéter …) - pommades stériles (brûlés …)
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PRINCIPE DE LA STÉRILISATION
Destruction des microorganismes vivants Chaleur, irradiation, chimie Rétention des microorganismes vivants Filtration (liquides ou gaz)
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2) STÉRILISATION PAR LA CHALEUR:
2 - 1) Facteurs utiles a) température et durée Formes végétatives des bactéries: en milieu aqueux: T > 56°C durée 5 à 60 minutes Formes sporulées: T = 100°C durée = plusieurs heures T = 110°C durée = plusieurs dizaines de minutes T = 120°C durée = plusieurs minutes
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La destruction des germes par la chaleur est une opération logarithmique dont le résultat est une probabilité liée à T° et durée Nombre de germes [G] T° = 121°C (standard Pharmacopée) dG/dT = - K G Probabilité 99,9999 % détruit Durée (mn)
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c) contamination initiale
Nombre de germes [G] N x 10 dG/dT = - K G N Probabilité 99,9999 % T T2 Durée (mn)
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Conditions à respecter:
- matériel de préparation propre - matières premières propres - procédures rigoureuses - personnel qualifié et entraîné régulièrement
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d) Humidité Bactéries: résistantes en milieu sec fragiles en milieu humide Exemple: destruction des spores du charbon: 3 heures à T = 150°C en milieu sec 45 minutes à T = 121°C en milieu humide
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3) MÉTHODES DE STÉRILISATION PAR CHALEUR SÈCHE
3 - 1) Flambage Flamme du bec Bunsen en microbiologie
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3 - 2) Four à air chaud Poupinel et Pasteur
T° > 150°C pendant 45 ’ à 1 heure petit matériel et pansements hospitaliers en conteneur alu 3 - 3) Four tunnel (industrie) T° > 250°C pendant quelques minutes verrerie injectable (stérilisation poussée) (destruction des résidus bactériens inertes)
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Autoclave: 4) MÉTHODE DE STÉRILISATION À CHALEUR HUMIDE
Effectué dans un autoclave avec de l'eau à ébullition Autoclave: Enceinte à volume constant isolée de la pression atmosphérique La température d'ébullition de l'eau augmente au dessus de 100°C par augmentation de la pression atmosphérique dans l'enceinte pression température maximale de l'eau 0 atm 100°C 0,5 atm 110°C 1,0 atm 121°C Standard Pharmacopée Européenne : T = 121°C pendant 15 minutes
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manomètre purge couvercle corps paniers Résistance immergée dans l’eau
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6 ) ANTISEPTIQUES 6 - 1 ) Antiseptiques liquides : a) ADDITION = Conservateurs Usage : préparation liquide à usage multiple Collyres, solution buvable, lotions, pommades Exemple: Ethanol à 20% (potions adultes) Ammonium quaternaires ( collyres < 2%o ) Parabènes ( pommades, solution buvable < 4%o ) Saccharose > 50% ( sirop ) Sorbate de potassium ( solution buvable ) Usage réglementé et restrictif
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b) STERILISATION : Matériel : Hypochlorite de soude Solution de peroxyde d'hydrogène à 2% (H2O2) Surface cutanée : Solution iodée (betadine) Ammonium quaternaire (chlorure de benzalkonium) Organomercuriels ( mercurescéine sodique) Alcool à 70 %
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6 - 2 ) Antiseptiques gazeux :
Matériel et locaux Qualités requises: - activité sur spores, bactéries, levures et virus activité à température peu élevée bonne diffusion inertie chimique - inocuité
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a ) Formol H - C - HO Facile à produire depuis le trioxyméthylène cristallisé par chauffage à 50°C actif sur tous germes Utilisé pour les locaux (24 h de contact puis ventilation forte)
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b) acide peracétique : Solution à 30 % utilisée par vaporisation ou aerosolisation Promoteur d 'oxygène natif. Utilisé pour les locaux et chambres d'hôpital
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d) Oxyde d'éthylène (epoxyéthane)
gaz incolore, Teb = +10.7°C explosif de 3 à 80% dans l'air agent alkylant pénétrant stérilise à travers un conditionnement papier actif sur tous germes Seringues à usage unique, gants de chirurgien ...
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7) RADIOSTERILISATION 7 - 1 ) Types de radiations Bêta : électrons accélérés produit par un accélérateur électrostatique Gamma : onde électromagnétique produit par un isotope radioactif ( Co 60 ) UV : Rayonnement ultraviolet produit par tube quartz à vapeur de mercure
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Mode d'action des radiations ionisantes
A) Fracture des molécules d'ADN, ARN … B) formation de radicaux libres oxydants H° : peu efficaces OH° : extrêmement puissants
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7 - 2 ) Pouvoir pénétrant UV : selon la longueur d'onde > Å pénétrant mais inactif > Å qq cm d'eau pure et actif < Å qq m d'air sec et très actif Utilisé comme entretien de stérilité des salles stériles
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Bêta : traverse plusieurs dizaine de cm de matière solide Gamma : traverse le double du rayonnement Bêta Utilisé tous deux pour la stérilisation de petit matériel et de matières premières en poudre sèche
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7 - 4 ) Application : UV Des tubes quartz à vapeur de mercure sont placés dans les salles à maintenir stériles. Ces tubes doivent être éteint en présence de personnel (atteinte rétinienne)
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Bêta: Accélérateur électrostatique Carton Tapis roulant
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Gamma : Caisse sur Palette, sur tapis roulant Électrode en Co 60
Sol de la salle blindée Piscine
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Produits radio-stérilisés :
matériel chirurgical sondes seringues à usage unique pansements matières premières végétales ou en poudre
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8) Filtration stérilisante
La stérilisation par filtration adopte l’utilisation de filtre écran Solution stérile Solution biochargée ouverture <= 0.22µm membranes: - acétate de cellulose - polyvinylidiène - PTFE - polyamide
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Filtration stérilisante
Utilisable que pour les fluides: gaz, liquide Pores du filtre : maximum µm Test de d’efficacité : Pseudomonas Diminuta Contrôle d’intégrité : Test de surpression Ce test est fait après la filtration Pour vérifier que le filtre est inaltéré
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Conditions initiales de la filtration stérilisante:
Matériel lavé et stérilisé Environnement classé à moins de 3500 particules / m3 Et préalablement stérilisé (Salle blanche) Opérateur vêtu de scaphandre ou tenue appropriée Solution à filtrer avec moins de 10 germes /100 ml < 10 CFU / 100 ml
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Conditions finales de la filtration stérilisante:
La solution doit être recueillie aseptiquement Conditionnement lavé et stérilisé Bouchage immédiat après répartition dans le conditionnement
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Azote comprimé solution vrac non stérile Filtre 0,22 µm environnement aseptique matériel préalablement stérilisé
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8 ) Contrôle de la stérilité
Boite de Petri + gélose solide et ensemencement Tube gélosé liquide et ensemencement profond Le contrôle est effectué sur 7 et 14 jours pour les bactéries Le contrôle est effectué sur 28 jours pour les levures
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