Resultats et discussions -Extraction et purification des produits

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1 Resultats et discussions -Extraction et purification des produits
Extraction, séparation, caracterisation et mise en evidence de l’activité antioxydante des differents composés isolés de Calancoba glauca Agbo Achimi Abdul Jabar B. Pacomea,b, Tsafack Nguemo Rolande Bertilleb, Mpetga Simo Deke Jamesb*, Awouafack Maurice Ducretb, Takuya Itoc, Bikanga Raphaela, Hiroyuki Moritac, Tane Pierreb, a Laboratory of natural products, Department of Chemistry, Faculty of Science, University of Sciences and Technics of Masuku, Box 943, Franceville, Gabon b Laboratory of natural products chemistry, Department of Chemistry, Faculty of Science, University of Dschang, Box 183, Dschang, Cameroon c Institute of Natural Medicine, University of Toyama, 2630-Sugitani, Toyama , Japan Resultats et discussions - Purification et caracterisation des produits Introduction Conclusion METHODOLOGIE -Extraction et purification des produits Le genre Caloncaba appartient à la famille des Flacourtiacae (Hutchinson et Daziel, 1954). Cette famille compte près 800 espèces (Miller, 1975 ; Lemke, 1988), on les retrouve dans les régions tempérées en Amérique et dans les régions tropicales. Le genre Caloncaba est réputé pour le traitement des maladies de la peau, la lèpre, la syphilis (Tchuendem et al., 1996). Plusieurs métabolites secondaires ont étés isolés des Caloncoba ainsi on peut parler des triterpenes pentacycliques, (dammarane, malabricane , cycloartane …) (Mpetga et al., 2012). Caloncoba glauca est très utilisé en médecine traditionnelle en Afrique centrale. Plusieurs études phytochimique sur cette plante montre que les composés isolés présentent des activités biologiques significatives. Dans le but d’isolé de nouveaux métabolites secondaires et d’effectuer une comparaison sur les métabolites secondaire isolés des caloncoba du Cameroun et ceux du Gabon. Nous avons entrepris l’étude phytochimique de Caloncoba glauca. L’étude phytochimique de l’extrait à l’AcOEt de Caloncoba glauca a conduit a l’isolement de cinq composés purs (CGS1, CGS2, CGS3, CGS5, et CGS7). Les propriétés antiradicalaires de l’extrait à l’AcOEt, et des produits purs ont été mise en évidence par la méthode bio-autographique. Les produits purs ( CGS1 et CGS7) ont présentés une activité remarquable vis-à-vis du radical DPPH, il en est de même pour l’extrait à l’AcOEt. Caloncoba glauca apparait ainsi comme une source naturelle des composés antiradicalaires. Il est également important de signalé que le genre Caloncoba regorge de lignanes et d’alcaloides. Ces métabolismes secondaire sont isolé pour la première fois dans ce genre et dans cette espèce. Les chromatographies répétées sur colonne de gel de silice et /ou de sephadex de l’extrait a l’AcOEt (78,7 g) ont conduit à l’isolement cinq composés. Il s’agit ici d’une lignane ( CGS1), une triterpène (CGS 5) et d’un alcaloide (CGS7). L’analyse de ces produits par des techniques spectroscopiques usuelle telles que la RMN 1H et 13C dans ses multiples techniques à une et deux dimensions (COSY 1H-1H, HSQC, HMBC et NOESY) et par comparaison des données avec celles décrits dans la littérature a permis de les identifier respectivement à la sesamin (CGS1), le lupéol (CGS 5) et la dictamine (CGS7). . Les propriétés antiradicalaires de l’extrait brut, et des composés purs ont été mise en évidence par la méthode bioautographique sur plaque de CCM pulvérisée avec une solution éthanolique de DPPH. Les résultats de ce test montrent que le produit CGS 5 ne présente pas des propriétés antiradialaire à l’égard du DPPH. Cependant cette activité est remarquablement observée dans l’extrait brut, et dans les composés CGS1 et CGS7. Figure : Protocole d’extraction et de purification des produits des écorces de Caloncoba glauca Elucidation des structures Les structures des composés isolés ont été déterminées par des techniques de RMN une et deux dimensions et en comparant les données issues de l’interprétation des spectres avec celles publiées dans la littérature. Test antiradicalaire par la methode Bioautographique L’activité antiradicalaire de l’extrait à EtOH , et des composés isolés a été mise en évidence par la méthode Bioautographique sur plaque de CCM en utilisant le radical DPPH. Les échantillons ont été déposés sur deux plaques de gel de silice ensuite développées dans les systèmes adéquats, l’une des plaques est ensuite révélées par une solution d’acide sulfurique 10% et utilisée comme référence pour identifier les composés et la deuxième est révélées par une solution ethanolique de DPPH 2%. Le passage de la couleur noir, rouge vif, violette et orange au jaune caractérise la présence des composés ayant une activité antiradicalaire (Brand et al., 1995) References Brand-Williams, W., Cuvelier, M. E., et Berset, C Use of free radical method to evaluate antioxidant activity.Lebensmittel Wiss. Technol. 28: 25–30. Hutchinson, J., Dalziel, J.M., (revised by Keay, R.W.J.) Flora of West Tropical Africa, vol. 1. H.M.S.O., London, 189. Lemke, D. E. (1988). A synopsis of Flacourtiaceae.Aliso12, 29-43 Miller, R.B., Systematic anatomy of the xylem and comments on relationships of Flacourtiaceae.Journal of Arnold Arbor, 56, Mpetga, J.D.S., Tene, M., Wabo, H.K., Li, S., Kong, L., He, H., Hao, X., Tane, P. (2012). Cytotoxic cycloartanes from the fruits of Caloncoba glauca.Phytochemistry Letters, 5, 183–187. Tchuendem, M.H.K., Ayafor, F.J., Connolly, D.J. (1996). Lophocarpin and 21β-hydroxylophocarpin, two new 30-norfriedelane triterpènes from Caloncobalophocarpa. Natural product letters, 9, Figure 1: Photos de Caloncoba glauca CGS 7 EB CGS 1 CGS 5 Figure 2: photos de l´évaluation de l´activité anti-radicalaire