Environnement, exposition, sensibilisation allergique :

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1 Environnement, exposition, sensibilisation allergique :
+ 45 kDa Environnement, exposition, sensibilisation allergique : Etude analytique d’un modèle de pollen de cyprès en Méditerranée 1- ESPCI ParisTech, PECSA, UMR 7195 CNRS, Paris, France; 2- Unité d’Immunologie, Autoimmunité et Hypersensibilité, Hôpital Bichat-Claude Bernard, Paris, France ; 3- Center of Molecular Allergology, IDIIRCCS, Rome, Italy, 4- Hôpital Nord, Marseille, France Y Shahali; LSABM, ESPCI-ParisTech, 24 novembre 2011 1 Colloque FGL Strasbourg

2 Allergie au pollen de Cupressacées dans le monde
E Scala et coll. 2010 23,077 patients ISAC 75 allergènes Cup a 1: 43% 2 Colloque FGL Strasbourg

3 Les risques allergiques en France
Source: RNSA 2003 Source: INRA 2010 3 Colloque FGL Strasbourg

4 Pollen de cyprès: aspects particulaires
fragilité de l’exine Pollen: µm de diamètre Orbicule: nm de diamètre 5 µm Micrograph of an Arizonica cypress pollen Shahali et al. 2007, 2009 300 nm Orbicules 4 Colloque FGL Strasbourg

5 Exposition expérimentale du pollen de cyprès au NO2
Etude en collaboration avec le PC2A "Physicochimie des Processus de Combustion et de l'Atmosphère", Université Lille 1. 5 Colloque FGL Strasbourg

6 Extraction aqueuse ex cy in 6 Colloque FGL Strasbourg

7 1er contact antigénique
Mécanisme de l’allergie et identification des allergènes 1 – évaluer le répertoire des allergènes 2- évaluer le répertoire des IgE des patients allergiques 2e contact antigénique masto ou baso 1er contact antigénique IgE du sérum, spécifiques des allergènes auxquels le patient est sensibilisé Th2 IL-4 IL-13 Be IgE Ag Ag cytokines leukotriènes PAF prostaglandines enzyme HISTAMINE Sensibilisation APC chemokines dégranulation symptômes cliniques 7 Colloque FGL Strasbourg

8 µg de protéine par gr de pollen méthodes d’extraction Ratio
Différentes extractions des protéines du pollen 1975 *TUC 1496 SDS 150.5 PBS 91 H20 µg de protéine par gr de pollen méthodes d’extraction 1.7 10 17 21 Ratio *2 M Thiourea, 7 M Urea, 2% CHAPS 8 Colloque FGL Strasbourg

9 Criblage en SDS-PAGE 1-D avec un extrait SDS
Serums anti-HMW Serums anti-14 kDa 9 Colloque FGL Strasbourg

10 Electrophorèse 2-D sur des extraits polliniques
kDa Cup s 1 - 94 1 H2O 1 - 67 - 43 - 30 - 20 - 14.4 4.45 5.1 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 9.6 4.45 5.1 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 9.6 pI pI b d PG kDa Cup s 1 - 94 2 2 1 - 67 PBS 1 - 43 1 - 30 3 - 20 3 ? - 14.4 10 Colloque FGL Strasbourg

11 Cinétique d’extraction des protéines du cyprès de Provence en PBS
kDa 11 Colloque FGL Strasbourg

12 Comparaison de la réactivité IgE aux protéines du pollen de cyprès de Provence chez les patients Italiens et Français 23.3% 60.1% 16.6% 30.5% 44.5% 25% kDa negative HMW BP14 BP14 HMW negative 12 Colloque FGL Strasbourg

13 Allergène de 14 kDa fortement exprimé dans le pollen
de Cupressus sempervirens Cyprès d’Arizona Cyprès de Provence Ca Cs kDa 94 94 67 45 30 20.1 14.4 13 Colloque FGL Strasbourg

14 CONCLUSION Le pollen de cyprès est une source importante de fines particules submicroniques Optimisation de l’extrait de pollen de cyprès utilisation de détergents et d’agents chaotropiques Révélation de nouveaux allergènes Deux profils d’immunoréactivité allergènes de haute masse moléculaire allergène de 14 kDa L’importance des conditions d’exposition et de l’espèce sensibilisante L’apport de la biochimie analytique et de l’allergologie moléculaire l’étude du répertoire des allergènes L’analyse de la diversité de la réponse allergique (pollen, moisissures, acariens, aliments…) 14 Colloque FGL Strasbourg

15 Remerciements Pascal PONCET Jean-Pierre SUTRA Iman HADDAD
Gabriel PELTRE Hélène SENECHAL ESPCI ParisTech, LSABM Iman HADDAD Emmanuelle DEMEY Joëlle VINH ESPCI ParisTech, LSMBP Sylvie CHOLLET-MARTIN Pascale NICAISE INSERM U996, Paris Denis CHARPIN Hôpital Nord de Marseille Philippe CHAFEY ICGM, Paris Adriano MARI CMA, Rome, Italy Laurence GUILLOUX Biomnis, Lyon