La parasexualité des bactéries Le génome bactérien

La parasexualité des bactéries La transformation bactérienne (Griffith 1928)

La parasexualité des bactéries La conjugaison

La parasexualité des bactéries La transduction

Comparaison de quelques caractéristiques d'organismes modèles avec celles de l'espèce humaine

Les méthodes du génie génétique Endonucléases de restriction : (enzymes de restriction) Activité : reconnaître une séquence définie de l'ADN (site de reconnaissance, (4 à 8 bases) et couper dans ou à proximité de cette séquence. Bouts francs (blunt end) : Bouts cohésifs (sticky end) :

Les méthodes du génie génétique Recombinaison du gène et insertion dans la cellule hôte Les ligases ADN ligase d'E. coli : ligation des extrémités cohésives produites par certaines enzymes de restriction. ADN ligase du phage T4 : même activité mais peut liguer des extrémités franches

Les méthodes du génie génétique Recombinaison du gène et insertion dans la cellule hôte L'enzyme de restriction EcoR1 autour de son substrat, une séquence spécifique d'ADN.

Les méthodes du génie génétique Recombinaison du gène et insertion dans la cellule hôte Les vecteursles plasmides La plupart des plasmides sont des molécules d'ADN circulaires double- brin, beaucoup plus petite qu'un chromosome : de 3000 à paires de bases Ils sont optionnels pour la cellule hôte. Les plasmides peuvent coder pour diverses fonctions.

Les méthodes du génie génétique Recombinaison du gène et insertion dans la cellule hôte Les vecteursles virus Transfert de gènes thérapeutiques (thérapie génique) RétrovirusAdénovirus Herpèsvirus Transfert, expression et réplication d'ADN étranger dans une cellule hôte en vue d'un clonage moléculaire. Bactériophage

Les méthodes du génie génétique Recombinaison du gène et insertion dans la cellule hôte Les vecteursles yacs Chromosomes artificiels de levure ( "Yeast artificial chromosomes") Principe du clonage d'un fragment d'ADN humain dans un YAC

Les méthodes du génie génétique Recombinaison du gène et insertion dans la cellule hôte Les vecteursles yacs

Les méthodes du génie génétique Recombinaison du gène et insertion dans la cellule hôte Les vecteursles yacs Il est par la suite possible de réextraire spécifiquement l'ADN recombiné de tout clone d'intérêt.

Les méthodes du génie génétique L ’amplification par PCR Analyse du génome

Les méthodes du génie génétique Hybridation in situ Analyse du génome

Les méthodes du génie génétique 1-clivage enzymatique de restriction Southern blot 2- électrophorèse sur gel d'agarose 3- dénaturation dans le gel des fragments de restriction Analyse du génome

Les méthodes du génie génétique 4- transfert sur support solide (membrane de nylon ou nitrocellulose) par capillarité Southern blot 5- fixation de l'ADN sur la membrane par cuisson (mb. nitrocellulose) ou exposition U.V (mb.nylon) Analyse du génome

Les méthodes du génie génétique 6 - hybridation avec une sonde marquée dénaturée Southern blot 7- lavages 8- autoradiographie Analyse du génome

Les méthodes du génie génétique Le séquençage (Sanger) Analyse du génome

Les méthodes du génie génétique Le séquençage moderne Analyse du génome Le DNA à séquencer est dénaturé. L’ADN monocaténairesert de matrice. On ajoute: - tous les nucléotides en quantité suffisante - un mélange des 4 didésoxynucléotides, chacun marqué par une couleur différente - La DNA polymerase I La synthèse des brins se fait à partir de l’amorce jusqu’à ce que l’un des ddnucléotides ne la bloque. Il sera donc produit des brins de longueur différente. L’electrophorèse sépare les brins du plus long au plus court. Un laser active et lit les couleur, l’ordinateur fait le reste...

Production de médicaments

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Applications en génétique humaine Des chercheurs du CNRS ont réalisé une grande avancée dans le traitement de Xeroderma pigmentosum. Entre 30 et 50 enfants sont atteints en France. Surnommés les enfants de la Lune. L’idée était de corriger les cellules souches par thérapie génique, afin de reconstituer une peau saine puis de la greffer aux patients.

Applications en agriculture

Document Greenpeace Le maïs transgénique MON 863 de MONSANTO, une bombe à retardement ? Sûrement, car il est toxique pour les rats et a manqué se retrouver dans votre assiette ! Applications en agriculture

Transgénèse animale Embryon et placenta (jour 10,5 de gestation) de souris transgénique pour la GFP (green fluorescent protein). Microinjection d'ADN dans un embryon

Transfert d’un gène homéotique Les 422 acides aminés de la protéine synthétisée chez l'Homme grâce au gène PAX6, un gène régulateur du développement embryonnaire sont identiques chez la souris, et sont quasiment identiques (97%) chez les poissons. On le retrouve aussi chez un ver plat (Dugesia trigrina), un ver némerte (Lineus sanguineus), un calmar (Loligo vulgaris), une ascidie (Phallusia mammilata) et les insectes. Ce gène régulateur 'maître' PAX6 va entraîner une cascade d'événements issus de 2000 à 3000 gènes qui vont finalement aboutir à la formation de l'oeil. Transgénèse animale