Le dosage de l’EPO lors du contrôle du dopage L’application de l’électrophorèse

EPO / Une hormone peptidique / 166 acides aminés et 3 chaînes glycilisées / 34’000 Daltons

Les effets de l’EPO / Accélérer la prolifération des CFU-E / Accroître leur différenciations en cellule érythroblastique / Diminuer le temps de transit médullaire / Favoriser la sortie des réticulocytes de la moelle / Peut-être accroître, en cas d’hypoxie, le volume total des érythroblastes espaces graisseux, puis aux dépense du tissu médullaire non myélo / Accélérer la prolifération des CFU-E / Accroître leur différenciations en cellule érythroblastique / Diminuer le temps de transit médullaire / Favoriser la sortie des réticulocytes de la moelle / Peut-être accroître, en cas d’hypoxie, le volume total des érythroblastes espaces graisseux, puis aux dépense du tissu médullaire non myélo

Sur le plan sportif / Pour augmenter leur capacité quand ils font du sport,ils s’injectent l’EPO pour améliorer leur niveau du globule rouge

La détection de l’EPO / Centrifugation du sang - qualitative / Électrophorèse capillaire de zone - quantitative / Centrifugation du sang - qualitative / Électrophorèse capillaire de zone - quantitative

La centrifugation du sang Le niveau normal de l’EPO - chez les hommes: 42% - 54% - Chez les femmes: 37% - 44%

La limite de cette technique / L’apparition du nouveau produit : EPO génétique / Indifférent avec l’EPO naturel avec cette méthode / L’apparition du nouveau produit : EPO génétique / Indifférent avec l’EPO naturel avec cette méthode

La méthode de l’électrophorèse / Électrophorèse générale / Électrophorèse capillaire de zone

Quelques caractéristiques de l’appareillage / Un capillaire de silice de diamètre 50µm / Un voltage élevé: kv / Détecté par l’absorption de l’UV, fluorimètrie, conducmètrie / Volume d’injection est très faible: quelques nanolitre / Un capillaire de silice de diamètre 50µm / Un voltage élevé: kv / Détecté par l’absorption de l’UV, fluorimètrie, conducmètrie / Volume d’injection est très faible: quelques nanolitre

Les principes de l’électrophorèse capillaire Par 2 phénomènes: - Électromigration - électroosmose Par 2 phénomènes: - Électromigration - électroosmose

électromigration ce graphe décrit bien que la mobilité décroît quand le rapport charge/masse décroît

électromigration les migrations des charges respectent bien le principe: charge positive vers l’électrode cathode et charge négative vers l’électrode anode

électromigration / Mobilité électrophorétique: v=µE / La force du champ électrique: F=qE  La force opposée due à la viscosité: F’=6 π  vr / Mobilité électrophorétique: v=µE / La force du champ électrique: F=qE  La force opposée due à la viscosité: F’=6 π  vr

électromigration  À l’équilibre, i.e. avec une vitesse constante, F=F’. Donc µ=q/6 π  r  Proportionnelle à sa charge  Inversement proportionnelle au coefficient de viscosit é du milieu  Inversement proportionnelle à son rayon  À l’équilibre, i.e. avec une vitesse constante, F=F’. Donc µ=q/6 π  r  Proportionnelle à sa charge  Inversement proportionnelle au coefficient de viscosit é du milieu  Inversement proportionnelle à son rayon

électroosmose / À cause de l’interaction de la solution avec la silice du capillaire / Une double couche diffuse / Le flux électroosmotique

Les opérations de cette technique / Les capillaires en silices non recouverts / Spectrophotométre à 214 nm / Un tampon d’ECZ:tricine, NaCl, CH 3 COONa, urée, comme l’électrolyte / Les capillaires en silices non recouverts / Spectrophotométre à 214 nm / Un tampon d’ECZ:tricine, NaCl, CH 3 COONa, urée, comme l’électrolyte

Électrophorégramme de référence

Les avantages de cette technique / On peut calculer les pourcentages de chaque isoforme à partir de leur surface de pic / Si l’EPO artificielle, les pics seront différents par rapport aux ceux des naturelle / On peut calculer les pourcentages de chaque isoforme à partir de leur surface de pic / Si l’EPO artificielle, les pics seront différents par rapport aux ceux des naturelle