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1 1. Prologue.

Prologue. 2. Voyage dans la matrice Diagnostic différentiel Quest-ce que le PDGF?« platelet derived growth factor » = facteur de croissance dérivé des plaquettes Expliquer le concept d'inhibition de contact. Une culture cellulaire ne dépasse pas une certaine densité. La confluence bloque la croissance.

Prologue. 2. Voyage dans la matrice Hyaluronate Expliquer les valeurs des témoins. niveau de base cicatrisation = synthèse hyaluronate niveau le plus bas de dégradation Post cicatrisation = dégradation de lexcès de hyaluronate niveau le plus haut de dégradation

Prologue. 2. Voyage dans la matrice Hyaluronate Mesurer l'activité du sérum de Bruce Willis. Vm = 1/b = 16 nmol.L -1.mn -1 = µmol.L -1.mn -1 = UE 10 µL de sérum= UE/10µL = UE/mL 1,6 UE.mL -1 en cours de cicatrisation Comparer avec les normes et conclure.

Prologue. 2. Voyage dans la matrice Hyaluronate Pourquoi une si grande proportion de glycine? La glycine est le plus petit des acides aminés -----> Sa chaîne latérale entre dans lespace restreint entre les chaînes Sa présence permet de casser la structure en hélice plus ample Expliquer la présence de la proline Collagène.

Voyage dans la matrice Quelle est la bande à 450 kD? Collagène Expliquer l'allure des deux gels à t = 6 minutes. si neutralisation SRP à 6 mn -----> présence dans lumière RE -----> absence dans cytoplasme Que s'est-il passé sur les pistes 0 mn? si neutralisation SRP à 0 mn -----> absence dans lumière RE Pas de translocation Justifier la position de la bande sur la piste cyto. Forme collagène plus lourd -----> présence du peptide signal non excisé Expliquer l'allure des deux pistes 3. 50% de forme transloquée 50% de forme précurseur 3 mn représente le temps critique pour le démarrage de la translocation Collagène.

Prologue. 2. Voyage dans la matrice Hyaluronate.2.3. Collagène Quel est le rôle des protéines SRP? Elles bloquent la traduction à 3 mn Elles reconnaissent le récepteur canal

Prologue. 2. Voyage dans la matrice Hyaluronate.2.3. Collagène Calculer le coefficient d'extinction molaire des chaînes. Les concentrations à t = 0 peuvent servir de gamme étalon. C t = 0t = 15t = 5 µmol.L-1sansavec 00,000 20,0050,0240,101 40,0100,0400,172 80,0200,0600, ,0290,0720, ,0370,0790,362 C t = 0t = 15t = 5 µmol.L-1sansavec 00,000 20,0050,0240,101 40,0100,0400,172 80,0200,0600, ,0290,0720, ,0370,0790,362 a = 0,00245 µmol.L -1.mn -1 = a = mol.L -1.mn -1

Prologue. 2. Voyage dans la matrice Hyaluronate.2.3. Collagène Convertir les vitesses initiales en µmol.L -1.mn étapes: C t = 0t = 15t = 5 µmol.L-1sansavec 00,000 20,0050,0240,101 40,0100,0400,172 80,0200,0600, ,0290,0720, ,0370,0790,362 Abs -----> C C = Abs / Abs -----> Abs SH Dans le cas d'une réaction équimolaire C = CSH = Ct SH.C.l = t.Cl –.C.l SH = t - a SH = = – = mol.L-1.cm-1 Vi = C / ( x t) Vi = C / t pour les puristes: Vi = C / t sans ascorbate t = 15 mn avec ascorbate t = 5 mn C sansvit C µmol.L-1 0 0,00 2 0,162,00 4 0,273,43 8 0,405, ,486, ,527,20 µmol.L -1.mn -1 C'est une simplification honteuse car la stœchiométrie n'est pas connue:

Prologue. 2. Voyage dans la matrice Hyaluronate.2.3. Collagène Déterminer l'effet de l'ascorbate sur la formation du collagène. C t = 0t = 15t = 5 µmol.L-1sansavec 00,000 20,0050,0240,101 40,0100,0400,172 80,0200,0600, ,0290,0720, ,0370,0790,362 C sansvit C µmol.L-1 0 0,00 2 0,162,00 4 0,273,43 8 0,405, ,486, ,527,20 µmol.L -1.mn -1 Lascorbate active la synthèse du collagène

Voyage dans la matrice Collagène Quel est le nom de la maladie dont souffrait les marins par carence en ascorbate? Le scorbut

Voyage dans la matrice Analyser lallure des deux pistes Collagène.2.4. Fibronectine. La sonde A reconnaît 1 fragment La sonde B reconnaît 2 fragments dont le fragment A Comment expliquer la présence de deux bandes reconnues par la sonde B? La sonde B est « à cheval » sur deux fragments Comment expliquer la présence d'une bande commune avec les sondes A et B? Les deux sondes reconnaissent deux parties dune même séquence

Voyage dans la matrice Fibronectine Formuler une hypothèse expliquant l'ensemble des résultats. gène Sonde ASonde B Enzyme de restriction Sonde ASonde B

Fibronectine Analyser le cliché. Identifier les éléments qui le constituent. Segments épais Boucles fines Segments bicaténaires hybridés Segments monocaténaires Expliquer la présence de boucles. Séquences présentes sur lADN et absentes de lARN. 2. Voyage dans la matrice. ADN ARN Que peut-on en conclure? Transcription morcelée intron / exon

Fibronectine Analyser l'allure des pistes. Les sondes A et B reconnaissent plusieurs segments dADN. 2. Voyage dans la matrice. Certains sont en commun Expliquer la présence de bandes communes entre les deux pistes. A et B reconnaissent deux parties du même gène Comment justifier la présence de bandes différentes selon la sonde employée? Bandes différentes -----> ARN différents

Fibronectine Que peut-on conclure au sujet de l'ARNm de la fibronectine? Le même gène est transcrit en plusieurs versions dARNm -----> tous codent pour une version différente de fibronectine. 2. Voyage dans la matrice.

A quelle phase du cycle les cellules s'arrondissent-elles? Phase M = mitose 3. Cycle Les différentes phases du cycle Comment s'appelle la division cytoplasmique de la cellule? Cytodiérèse Donner le nom de la période séparant deux divisions. Interphase Quel évènement majeur à lieu pendant la phase S? Réplication

Calculer la vitesse spécifique de croissance de la culture. 3. Cycle Les différentes phases du cycle. µ = a = 0,0124 h Déterminer la durée d'un cycle cellulaire. G = Ln ( 2 ) / µ = 0,69 / 0,0124 = 56 h

Justifier la méthode employée pour calculer les durées des différentes phases du cycle. 3. Cycle Les différentes phases du cycle. Le pourcentage de cellules dans une phase est le reflet de la durée de cette phase Pour que cette méthode soit valide, la culture doit obéir à un impératif, lequel? La population cellulaire doit être en croissance asynchrone 24 h 1 / 12 phase M = 1 / 12 x 24 = 2 h

3.1.9 boîte 1boîte 2boîte 3 Cell totales Cell mitotiques Cell marquées boîte 1boîte 2boîte 3moy Cell totales Cell mitotiques Cell marquées Les différentes phases du cycle. boîte 1boîte 2boîte 3moy Cell totales % Cell mitotiques ,143 Cell marquées ,161 M = T cycle x % = 56 x 0,143 = 8 h 3. Cycle Déterminer la durée de la phase M Quelle est l'autre phase mesurée? Quelle est sa durée? boîte 1boîte 2boîte 3moy Cell totales % Cell mitotiques ,143 Cell marquées ,161 S = 56 x 0,161 = 9 h incorporation de la thymine pendant la réplication Quelle est l'autre phase mesurée? Quelle est sa durée?

Les différentes phases du cycle. 3. Cycle Analyser les résultats et conclure. Phase mitotique plus longue que la normale. 56 heures 8h 9h >> 2h

Les différentes phases du cycle. 3. Cycle Formuler deux hypothèses sur lorigine de ces phénomènes. activité kinase > 3.2. Phosphorylation. [Ez] > apparition dune nouvelle enzyme

Cycle. la présence de PDGF active les kinases 3.2. Phosphorylation Analyser les activités enzymatiques des cellules dans les quatre expériences. Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 T Sans PDGF 1520 T Avec PDGF B.W. Sans PDGF 908 B.W. Avec PDGF B.W. >> T cest normal!

Cycle Phosphorylation. Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 T Sans PDGF 1520 T Avec PDGF B.W. Sans PDGF 908 B.W. Avec PDGF Ces résultats permettent-ils de départager les deux hypothèses? 90 = = Ez normale + Ez nouvelle Km = cte Km = une seule enzyme moyenne de deux enzymes Apparition dune activité enzymatique nouvelle.

Cycle Phosphorylation.3.3. Traitement Jack doit-il choisir des inhibiteurs compétitifs ou non compétitifs? Justifier. Il doit choisir des INC! Les IC ne sont pas spécifiques d'une iso-enzyme particulière: ils bloqueraient l'ensemble du métabolisme kinase

Cycle Phosphorylation Calculer les paramètres enzymatiques dans chaque cas. cyclospérine amphoricol tryptodol ouabaïne cyclospérineamphoricolouabaïnetryptodol Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 T Sans PDGF T Avec PDGF B.W. Sans PDGF B.W. Avec PDGF Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L Quelle est l'action de la oubaïne? Ce choix est-il judicieux?

Cycle Phosphorylation Quelle est l'action de la oubaïne? Ce choix est-il judicieux? La oubaïne est un inhibiteur des pompes Na,K, ATPase Rien à voir avec les kinases Choix malheureux. T Sans PDGF T Avec PDGF B.W. Sans PDGF B.W. Avec PDGF Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 cyclospérineamphoricolouabaïnetryptodol Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 cyclospérineamphoricoltryptodol Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1

Cycle Phosphorylation Quelle est l'action de chacun d'eux? La cyclospérine agit sur toutes les kinases. Inhibiteur non spécifique Choix malheureux! T Sans PDGF T Avec PDGF B.W. Sans PDGF B.W. Avec PDGF Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 cyclospérineamphoricoltryptodol Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 cyclospérineamphoricoltryptodol Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 T Sans PDGF T Avec PDGF B.W. Sans PDGF B.W. Avec PDGF Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 cyclospérineamphoricoltryptodol Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 T Sans PDGF T Avec PDGF B.W. Sans PDGF B.W. Avec PDGF Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 Le tryptodol rétablit l'activité de l'iso-enzyme. Inhibiteur de la kinase normale Choix malheureux! cyclospérineamphoricoltryptodol Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 T Sans PDGF T Avec PDGF B.W. Sans PDGF B.W. Avec PDGF Vm nmol.L -1.mn -1 Km µmol.L -1 L'amphoricol rétablit l'activité normale. Inhibiteur de l'iso-enzyme C'est le bon choix! Quelle molécule choisir?