Identification bactérienne: Cocci Gram Positif

Bile-esculine Identification des enterococcus Esculine  esculitine + glucose (esculitine + Fe  citrate ferrique (brun foncé)) Milieu sélectif De la bile est ajoutée afin d’inhiber les bactéries gram + Enterococci peuvent survivre

Bile-esculine - +

Sensibilité à la novobiocine Test Kirby Bauer Capable de différencier S. saprophyticus des autres staphylococci S. saprophyticus est le seul staphylococcus résistant

Mannitol + sel d’agar Haute salinité (7.5%) : enrichie les staphylococcus Indicateur : phénol rouge Sources de carbone : mannitol et protéines Détecte la fermentation du mannitol Mannitol  formation d’acide

Mannitol + sel d’agar Positif – fermentation du mannitol Négatif – fermentation du mannitol Pas de croissance

Gélose d’agar Baird Parker/Tellurite Milieu sélectif: Chlorure de lithium Solution 1% de tellurite de potassium Milieu différentiel: Jaune d’oeuf : lécithinase (clair) Tellurite de potassium : coagulase-positif (noircissant)

Gélose d’agar Baird Parker/Tellurite

Test PYR Enzyme détectée : pyrrolidonyl peptidase L-pyrrolidonyl-β-napthylamide (PYR)  acide carboxylique L-pyrrolidone + β-napthylamine Réactions de détection: β-napthylamine + p-diméthyle-aminocinnamaldéhyde  précipité rose

Test PYR - +

Aggrégation cellulaire des Cocci Gram Positifs Micrococcus & Streptococcus Streptococcus Micrococcus Staphylococcus -l’agrégation peut être utilisée pour faire la distinction entre certains genres bactériens

Diagnostique des bactéries d’importance médicale

Utilisation de la clef d’identification http://mysite.science.uottawa.ca/jbasso/microlab/IDFlowcharts.pdf

Diagnostic : Cocci Gram positif Cocci Gram Positifs Streptococcaceae Catalase - Aérobie & anaérobie facultatif Streptococcus Micrococcaceae Catalase + Aérobie Micrococcus Staphylococcus

Caractéristiques des Cocci Gram Positifs Tous sont non sporulants Principalement retrouvés parmi la flore naturelle des humains et des animaux Exigences nutrionelles fastidieuses Utilisent des sources de carbones simples

Les Cocci Gram Positifs d’importance médicale Micrococcaceae Staphylococcus aureus Cause plusieurs types d’infections, maladies alimentaires et chocs toxiques Staphylococcus epidermidis Cause des infections opportunistes Staphylococcus saprophyticus Cause la majorité des cystites chez les femmes

Les Cocci Gram Positifs d’importance médicale Streptococcaceae Streptococcus pyogenes Pharyngite (strep throat) et infection à bactérie mangeuse de chair Streptococcus agalactiae Infections génitales Streptococcus mutans Endocardites Streptococcus pneumonia Otite, meningite et pneumonie Enterococcus spp. Infections opportunistes

Diagnostic : Bacilles Gram positif Bacilles Gram Positifs Sporulants Aérobie et aérobie facultatif Bacillus Anaérobie stricte Clostridium Non-sporulants Aérobie Listeria

Morphologies des endospores Position: Terminale (a, d, e) Subterminale (b) Centrale (c, f). Forme: Circulaire (b, d) Ellipsoïde (a, c, e, f) Diamètre: Non déformant (a, b, c) Déformant (d, e, f).

Les bacilles d’importance médicale Bacillus Majoritairement inofensifs Quelques espèces opportunistes Bacillus cereus & Bacillus subtilis Empoisonement alimentaire Une espèce pathogène Bacillus anthracis Anthrax Bacilles Gram Positifs Sporulants Aérobie et aérobie facultatif Bacillus Anaérobie stricte Clostridium Non-sporulants Aérobie Listeria

Les bacilles d’importance médicale Canned food that has not been sterilized properly; paralytic illness prolonged contraction of skeletal muscle fibers, neurotoxin produced by the bacteria Clostridium Plusieurs espèces pathogènes Clostridium perfringens Gangrène gazeuse Clostridium tetani Tétanos Clostridium botulinum Botulisme Clostridium difficile Diarrhée

Diagnostic : Bactéries à Gram (-) Oxydase Pseudomonaceae Neisseriaceae Fermentation du glucose Enterobacteriaceae Fermentation du lactose McConkey Enterobacter Escherichia Klebsiella Serratia Proteus Salmonella Shigella Morganella

Bactérie à Gram (-) représentatives Cocci Gram (-) Neisseria gonorrhoea Neisseria meningitis Bacilles Gram (-) Famille Enterobacteriaceae Escherichia, Enterobacter, Salmonella, Shigella, Klebsiella, Proteus, Morganella Famille Pseudomonaceae Pseudomonas

Immunologie

Immunologie But du système immunitaire: Immunité: Distinguer ce qui est le soi du non-soi Le non-soi – Les antigènes Immunité: Tous les mécanismes utilisés par l’hôte pour se protéger et combattre le non-soi

Non-soi - les antigènes Tout composé qui peut réagir avec les participants du système immunitaire Ex. anticorps Épitope: Caractéristique de l’antigène qui permet la reconnaissance comme étant non-soi Ex. Lipides, protéines, lipopolysaccharides

L’antigène Épitopes Virus=Antigène

Diagnostic sérologique/immunologique Déterminer la présence d’un antigène : Un organisme Une protéine Une toxine Un anticorps Dosage par la méthode d’ELISA Immunochromatographie (test rapide)

ELISA Utilisé pour déceler la présence d’anticorps ou d’antigènes Très sensible Quantitatif Rapide

ELISA – Détection d’Antigène Sérum (source d’Ag) est ajouté à des puits de plastique Agent bloquant est ajouté Ac contre Ag est ajouté Lavage Ac détecteur est ajouté Lavage Substrat est ajouté Antigène Présent Antigène Absent Y Y ENZ Y ENZ Y

ELISA – Détection d’Anticorps Ag cible pour Ac à déceler ajouté aux puits Agent bloquant est ajouté Sérum à tester est ajouté Lavage Ac détecteur est ajouté Lavage Substrat est ajouté Ac Présent Ac Absent Y Y ENZ Y ENZ Y

Interprétation des Résultats Essai pour Ag de virus X Plaque d’ELISA Lectures d’absorbances Standard Patient 1 Patient 2 Patient 3 Témoin nég. 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 Dilutions 3.8 1.9 0.8 0.4 0.2 0.1 0.04 0.03 0.05 3.6 3.0 1.6 0.12 0.06 Conclusions: Patient 1 n’est pas infecté Patients 2 & 3 sont infectés Patient 3 possède une charge 8X plus élevée de l’Ag

Interprétation des Résultats Essai pour Ac contre virus X Dilutions 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 Standard Patient 1 Patient 2 Patient 3 Témoin nég. 3.8 1.9 0.8 0.4 0.2 0.1 0.04 0.03 2.5 1.2 0.6 0.3 0.15 0.07 0.05 3.6 3.0 1.6 0.12 0.06 Plaque d’ELISA Lectures d’absorbances Conclusions: Patient 1 & 3 sont séropositifs Patients 2 est séronégatif

Semaine prochaine Dernier quiz Examen pratique: Faites certain que vous comprenez tout le matériel necessaire pour l’examen pratique, vous pouvez me demander de clarifier toutes les questions sur l’examen