Figure1:Un spectrophotomètre UV-visible(photo personnel) Méthodes d’études en biologie: Applications de la spectrophotométrie à la détermination d’une vitesse réactionnelle. Figure1:Un spectrophotomètre UV-visible(photo personnel)

Le Principe d’une mesure d’absorbance Figure 2 : Schéma détaillant les organes d’un spectrophotomètre (D’après Yassine Mrabet-Wikipédia.com) 𝐴=log⁡( 𝐼𝑜 𝐼 ) Dipôle électrique où R=f(I) Spectroscope à réseau: Sélection de la longueur d’onde

Les étapes pour effectuer une mesure Effectuer un spectre d’absorption Réaliser une courbe d’étalonnage qui fera le lien entre A et C Faire le Blanc Réaliser la mesure avec une cuve en quartz(UV) ou en plastique(visible)

Lien entre les mesures d’absorbances et la vitesse réactionnel La Loi de Beer-Lambert: 𝐴=𝜀∗𝑙∗𝑐 A=absorbance ε=coefficient d’extinction molaire(m3.mol-1 .cm-1 ) l=Longeur de la cuve(cm) c=Concentration molaire (mol.m-3) Vitesse d’une réaction chimique: 𝑉=± 𝑑 𝐵 𝑑𝑡 V=vitesse réactionnelle [B]= Concentration molaire(mol.L-1 ) Le ± vaut – lorsque B est un réactif et + si B est un produit 𝑉=± 1 𝜀∗𝑙 𝑑𝐴 𝑑𝑡

Un exemple d’utilisation de l’absorbance : Détermination de l’activité d’une enzyme, la LDH La LDH(lactatedéshydrogénase) catalyse selon sa composition en isoformes l’un des sens de la réaction suivante: LDH Lactate Pyruvate NAD+ NADH,H+ On se placera donc en excès de substrat et de coenzyme pour mesurer l’apparition ou la disparition de NADH,H+ par spectrophotométrie ce qui conduira a la détermination de la vitesse maximale de la réaction qui est un indicateur de l’activité de l’enzyme . Or le NADH,H+ absorbe à 340nm

limites et contraintes L’absorbption de la lumière n’est pas le seul phénomène optique qui se produit L’étude cinétique d’une réaction implique de perturber le système Elle implique aussi un temps mort Si on veut faire varier les concentrations initiales, cela requiert de nombreuses manipulations différentes La loi de Beer-Lambert impose des concentrations tels que A<2

Sources et bibliographie Webographie: http://www.jeulin.fr/ http://fr.wikipedia.org/wiki/Spectrophotométrie http://physique-eea.ujf- grenoble.fr/intra/Organisation/CESIRE/OPT/DocsOptique/Notices/Mo nochrom.pdf Bibliographie: Biochimie médicale-marqueurs actuels et perspective(2éme édition)- p42-43 (disponible sur google books)