Détection Antigène/anticorps BOISSONNAT Guillaume CASTILLO Dinorah GRABOT Laetitia Détection Antigène/anticorps Projet de biologie Moléculaire 15/04/2011

Objective Determine the interaction antibody-antigen by calculating affinity, using a real-time measure equipment. Get a refraction index that indicates the bonding between the antibody in the surface and the peptides present. Follow the interaction between an immobilized peptide and an antibody in solution by using a surface Plasmonic Resonance.

Surface Plasmon Resonance I0 I/I0 Angle I Angle Angle de résonance Or Prisme Mesure de l’angle de résonance du prisme L’angle de résonance est due à l’apparition d’une onde évanescente (plasmon)

Surface Plasmon Resonance Les plasmons sont sensibles à la masse des éléments à la surface de la couche métallique Ainsi l’angle de résonance change en fonction de la masse “accrochée” à l’or

Protocole expérimental Etape 1 : Fonctionnalisation du prisme Etape 2 : Dépôt des peptides Etape 3 : Vérification de l’homogénéité Etape 4 : SPR

Etape 1 : Fonctionnalisation du prisme Prisme d’or simple Nettoyage du prisme au plasma Bain dans l’aminothiol Lavage Prisme d’or fonctionnalisé

Etape 2 : Dépôt des peptides Peptide K-linker-c-myc : NH2 - KGGSGGSYGGSGGSEQKLISEEDL - COOH Peptide K-linker-Flag : NH2 - KGGSGGSYGGSGGSDYKDDDDK – COOH Peptide K-linker-His : NH2 - KGGSGGSYGGSGGSHHHHHH – COOH Dépôt au robot Blocage du prisme à l’éthanolamine

Etape 3 : Vérification de l’homogénéité Suivi par mesure de la tension de surface Après chaque étape : mesure de l’angle de goutte Utilisation d’un goniomètre Suivi par marquage au SYPRO orange Protocole à détailler

Etape 4 : SPR Initialisation de l’appareil Mesure de l’angle de résonance Passage des tampons avec les différents anticorps Obtention de courbe de réflexitivé en fonction de l’angle Mode pour déterminer la cinétique. Mode pour déterminer la concentration en anticorps.

Gestion du projet/ Gant Chart

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