HIA Bégin, service de biologie Place du laboratoire dans la prise en charge des patients atteints de fièvre hémorragiques virale MC Hernandez eric HIA Bégin, service de biologie

Introduction Fièvre hémorragique virale toujours le samedi soir si possible après 20 h 00 chez un malade grave et bien sur « urgent » Mais que veux donc le clinicien ? mais que peut faire le laboratoire ?

Objectifs de ce cours Présenter les agents des FHV et leur résistance Les prélèvements à réaliser Modalités de transport CAT au laboratoire pour le diagnostic et la prise en charge du patient Méthodes de diagnostic utilisables

Généralités Virus à ARN Enveloppés, fragiles dans le milieu extérieur Syndrome commun hémorragies externes hémorragies internes état de choc

Famille Genre Virus Fièvre hémorragique Flavivirus Flaviviridae Flavivirus Amaril Fièvre Jaune Dengue Dengues Omsk Fièvre hémorragique d’Omsk Kyasanur M. forêt de Kyasanur Bunyaviridae Phlebovirus Rift Valley Fièvr e de la Vallée du Rift (FVR) Nairovirus Crimée - Congo Fiévre Hémorragique de Crimée - Congo (CHF - C) Hantavirus Hantaan (FHSR) Puumala Arenaviridae Arénavirus Junin Fièvre Hémorragique d’Argentine Machupo FH de Bolivie Guanarito FH du Venezuela Sabia Fièvre de Lassa Lassa Filoviridae Filovirus Marburg Maladie de Marburg Ebola Maladie à virus Ebola

Transmission nosocomiale Aérosols Contacts étroits avec un malade Fluides biologiques urines sang Matériel souillé

Désinfection Virus fragiles dans le milieu extérieur Sensibles aux désinfectants eau de Javel 3,6° Cl déchets, déjections, produits biologiques eau de javel 0,5° Cl mains nues, peau, petit matériel virucidie obtenue si > 0,15°Cl Nota : (1° = 10000 ppm = 1 mg/L)

Désinfection (2) Matériel à usage unique Matériel réutilisable containers étanches, double emballage eau de javel 3° Cl (1% de chlore actif) ou éventuellement autoclavage avant incinération. Matériel réutilisable matériel réutilisable ---> peroxyde d’hydrogène, glutaraldéhyde eau de javel ou stérilisation par autoclavage

Prélèvements Diagnostic virologique Examens de prise en charge du patients

Diagnostic virologique Prélèvements sanguins ++ 2 tubes héparinés (anticoagulant) Cultures, recherche des antigènes, RT-PCR 2 tubes secs RT-PCR, sérologie Tissus (patients décédés) foie, rate, cœur, poumons, rein ---> tous virus FHV peau --> Ebola

Examens de prise en charge Limiter les analyses au strict nécessaire précautions de transport / pas de centrifugation NFS - plaquettes sur automate (bouchon fermé) hémostase (tube décanté, bouchon fermé, sur automate frottis pour recherche de paludisme (sous hotte) sérologies (sérum inactivé) transaminases, créatinine (sérum inactivé) bactériologie : hémocultures, LCR Assurer protection du personnel (vêtements, masque, hotte….) traçabilité / élimination des déchets

Prélèvement Protection physique Utilisation de matériel de sécurité tenue Tyvek masque FFP3 surblouse, lunettes, gants Utilisation de matériel de sécurité Application des précautions standard

Etiquetage et renseignements cliniques nom, prénom, date naisance, lieu naissance, type prélèvement, date, heure, nom du préleveur Renseignements cliniques: indispensables

Importance des prélèvements Diagnostic précoce Prise en charge efficace Levée de l ’isolement Prélèvements de bonne qualité

Transport au laboratoire (1) Documents Primaire Secondaire Tertiaire

Transport au laboratoire (2)

Envoi au LSB4 (1) 2 tubes secs 2 tubes héparinés triple emballage Transport + 4° C Envoi laboratoire P4

Envoi au LSB4 (2) Prise de contact avec le centre de référence CR des FHV (Hambourg), Laboratoire P4 Biomérieux (Lyon) Triple emballage agréé (ministère transport) Etiquetage conforme Document de bord document de transport ou déclaration permanente document identifiant les marchandises et la quantité consignes en cas d’accident conservées dans la cabine, lues et comprises. Réserve au laboratoire: 1 tube sec + tube hépariné Conservation - 20°C

Obligations du transporteur Véhicules fermés ou couverts Matériel de transport et équipement - moyens d’extinction incendie - cale, deux signaux d’avertissement, baudrier ou vêtement fluorescent, lampe de poche. Prescriptions générales pour les conducteurs formation aux prescriptions régissant ce type de transport verrouillage du compartiment chargé transport de voyageurs interdit utilisation des moyens d’extinction incendie Délai minimal de transport et rendu des résultats 24 -36 heures

Traitement des examens de prise en charge au laboratoire Objectifs garantir la sécurité du personnel Servir le malade assurer la traçabilité des actions pour prise en charge diagnostic traitement

déconditionnement sous hotte Au laboratoire déconditionnement sous hotte Sérologie biochimie: Inactivation du sérum sous hotte Triton 2% + Tributyril phosphate 2%, (45°C pendant 1 heure) ---> sérologies Test unitaire VIH MNI test ---> transaminases ---> créatinine Tube EDTA (passer tube eau javel) - NFS Plaquettes - frottis sanguin sous hotte fixation alcool Recherche paludisme - test rapide Tube citraté décanté: Groupe sanguin distribution en microplaque fermée, désinfectée sous hotte

Examens automatisés Priorité +++ automates fermés tube primaires désinfection neutralisation des déchets

Tests rapides

Examens sur sérum inactivé Toutes les sérologies sont possibles La coagulation n’est pas fiable sauf PDF, Fibrinogène et D-Dimères

PCR avec extraction automatique en laboratoire LSB3

Conclusion Prise en charge complexe Nécessité d’un minimum d ’examens biologiques dans l’intérêt du patient Les virus ne « sautent pas » Faut-il attendre 24 -36 h pour faire un diagnostic de paludisme ?