TUBERCULOSE: EPIDEMIOLOGIE ET METHODES DE DIAGNOSTIC CLASSIQUE Pr. L.SLIM-SAIDI Laboratoire de microbiologie Hôpital A.Mami de Pneumologie – Ariana - TUNISIE

Tuberculose: maladie antique La tuberculose (TBC) est une maladie infectieuse dûe à une mycobactérie: Mycobacterium tuberculosis (BK) 1ers cas: 8000 ans Momies égyptiennes Infection redoutable 1 homme / 7 en est mort Maladie contagieuse ; transmission interhumaine La TBC reste toujours un sujet d’actualité Amenophis IV

Recrudescence TBC TBC & SIDA TBC multirésistante

Les 10 causes de mortalité les plus fréquentes 1990 2020 1 Infections respiratoires Maladies cardiaques 2 Diarrhées Dépression sévère 3 Complications naissance Accidents circulation 4 Dépression sévère Attaque (AVC) 5 Maladies cardiaques M.pulmonaire chronique 6 Attaque (AVC) infections respiratoires 7 Tuberculose Tuberculose 8 Rougeole Guerre 9 Accidents circulation Diarrhées 10 Affections congénitales SIDA

Mycobacterium tuberculosis Bacille de Koch 1882 Principal agent de la tuberculose

MYCOBACTERIES Complexe tuberculosis:  Tuberculose Mycobacterium tuberculosis (homme) Mycobacterium bovis (animal) Mycobacterium africanum (homme) Transmission interhumaine +++ Mycobacterium leprae  Lèpre

MYCOBACTERIES Immunodéprimés/ SIDA… Mycobacéries atypiques: M. kansasii gg, pneumopathies M. marinum ulc. cutanées M. scrofulaceum gg M. avium-intracellulare gg, pneumopathies M. fortuitum Bactéries de l’environnement, commensales opportunistes Immunodéprimés/ SIDA…

MYCOBACTERIES: bactéries particulières Bacilles aérobies strict, difficile à colorer Paroi riche en lipides (ac.mycoliques, · Acido-Alcoolo-Résistance => BAAR · Résistance aux désinfectants, antiseptiques, ATB · Résistance aux enzymes lysosomiales Multiplication lente: 18H (E.coli 20 mn) Culture 2 – 3 semaines et plus Multiplication intracellulaire (PN, macrophages) Mutants résistants « souches sauvages » (1/105 INH, Sm - 1/ 107 Rif) Association obligatoire d’antituberculeux

TUBERCULOSE Transmission Voie aérienne Malades bacillifères aérosols contaminés Toux, éternuements, paroles

PATHOGENIE DE LA TBC Inhalation de M.tuberculosis Primo-infection Asymptomatique (95 %) Tuberculose aiguë (5%) Infection latente Immunité cellulaire Pas de maladie 90% Tuberculose de réactivation (10%)

Tuberculose pulmonaire Tout symptôme respiratoire et toute anomalie RX inexpliqués  suspecter la TBC Début progressif ++ Asthénie, Anorexie, Amaigrissement Toux sèche puis productive trainante Fièvre Sueurs nocturnes

Tuberculose pulmonaire Radiographie thorax : Images nodulaires Images cavitaires « cavernes » Opacités en plage « infiltrats » Caractéristiques des lésions : Bilatérales et polymorphes Lobes supérieurs ou Segments supérieurs des lobes inférieurs

Tuberculose extra-pulmonaire Ganglionnaire 13 % Pleurale 10 % Autre 9 % Adulte jeune:15 - 40ans (61–68%) Sexe ratio = 1,4  TBC pulmonaire  Homme  TBC extra-pulm Femme

EPIDEMIOLOGIE La TBC touche le sujet jeune de 15 à 40 ans : 61- 68 % Taux d’incidence spécifique par tranche d’âge

EPIDEMIOLOGIE Sujets à risque +++ Immunodéprimés Infection HIV Personnes défavorisées socio-économiquement ou vivant en collectivité : Sans domicile fixe, migrants Orphelinat , maison de retraite, milieu carcéral Toxicomanes

TUBERCULOSE DANS LE MONDE - 2000 Arch Intern Med.2003;163:1009-1021 La TBC reste un fléau mondial, Pays en voie de développement++  2 Milliards personnes infectées 8,4 Millions nouveaux cas 20 Millions personnes atteintes de TBC  60 % TBC pulmonaire bacillifère  79 % tuberculeux n’ont pas accés aux traitements  3 Millions de décès  98 % :pays en voie de développement

TUBERCULOSE ET HIV chez l’ADULTE Arch Intern Med.2003;163:1009-1021

Résistance aux antituberculeux Résistance primaire Résistance acquise Réservoir de germe Programme de lutte MDR= INH+ RIF

TUBERCULOSE MULTIRESISTANTE WHO/CDS/TB/2000.278

Comment réduire l’épidémie ? Dépistage rapide des cas Traitement adéquat: Polychimiothérapie Mts actifs sur les 3 populations BK Monoprise et durée prolongée +++ Guérir les patients; Eviter les récidives  Prévenir l’apparition des formes chroniques et Résistantes  Briser la chaine de transmission  Tarir la source de contamination

Comment réduire l’épidémie ? Dépistage efficace Diagnostic sensible et rapide  Guérir les patients; éviter les récidives  Prévenir les formes chroniques et Résistantes  Briser la chaine de transmission  Tarir la source de contamination Traitement précoce adapté et prolongé

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIQUE MICROSCOPIE CULTURE (Lowenstein Jensen) Identification Antibiogramme  Confirmation bactériologique tardive  Réduire délai de détection, d’identification RADIOMETRIQUE (BACTEC) NON RADIOMETRIQUES (MGIT – MB redox) HYBRIDATION AMPLIFICATION GENIQUE / PCR

PRELEVEMENTS Tuberculose pulmonaire Expectoration Tubages gastriques Aspirations bronchiques Lavages broncho-alvéolaires Répéter les prélèvements ( au moins 3 ) Tuberculose extra-pulmonaire Liquide pleural LCR Urines Liquides de ponction : péricardique, articulaire Ganglionnaire Hémocultures

Examen microscopique Coloration de Ziehl-Neelsen • Coloration à l’Auramine O

n’exclut pas le diagnostic MICROSCOPIE Méthode simple peu coûteuse. Rapide (< 1H) Non spécifique: BAAR (genre) Peu sensible 5.103 à 104 bacilles /ml TBC bacillifères Contagieuses Isolement M. quantitative Gravité de la tuberculose Evolution sous traitement Résultat négatif n’exclut pas le diagnostic  CULTURE

PERFORMANCE de la MICROSCOPIE Sensibilité % Spécificité VPP Levy (1989) Gordin (1990) Kramer*1990 Kim 1984 Greenbaum 1980 Klein 1989 53.1 45.7-55.3 61 74.4 32-52 45* - 81 99.8 > 99 - 98.5 91.5 - 98

MICROSCOPIE Tuberculoses pulmonaires Tuberculoses extra-pulmonaires Adulte 60 - 80% Enfant < 20% HIV 40-50% Tuberculoses extra-pulmonaires M+ 10 - 40%

De la théorie a la pratique EXAMEN MICROSCOPIQUE De la théorie a la pratique

n’exclut pas le diagnostic Résultat négatif n’exclut pas le diagnostic  CULTURE

CULTURE Améliore les résultats de l’examen direct  Identification sensibilité ( 60- 90%) – spécificité 100%  Isolement de la mycobactérie  Identification  Antibiogramme  Epidémiologie  Critère de guérison (négativation ultérieure) Inconvénient: Lenteur : 21- 28 jours - 2mois

CULTURE Traitement des échantillons Culture en milieu solide (LJ référence) Culture en milieu liquide Prlvts polymicrobiens: fluidification + décontamination élimine la flore associée Prlvts monomicrobiens: lyse concentration, centrifugation

LAURYLSULFATE DE SODIUM N-Acétyl-L-Cystéine Soude   DECONTAMINATION-FLUIDIFICATION   METHODES LAURYLSULFATE DE SODIUM Tacquet et Tison SOUDE Petroff CHLORHEXIDINE N-Acétyl-L-Cystéine Soude Kubica Prélèvement 2 ml maximum Homogénéisation Et Décontamination     Ajouter 3 ml de Laurylsulfate de sodium Vortexer Agitateur de Kahn pendant 30 minutes Ajouter 2 ml de soude à 4 %  Vortexer Placer à 37°c pendant 20 minutes + si le prelevement n’est pas correctement fluidifie Ajouter 2 ml de dithiothréitol Agitateur de Kahn 15 minutes Ajouter 6 ml de chlorhexidine à 1% Agitateur de Kahn pendant 15 minutes   Ajouter 2 ml de la solution : Soude/citrat+ N-Acétyl-L-Cystéine 0,5% Agitateur de Kahn 20 minutes Neutralisation Ajouter la solution neutralisante jusqu’à virage au jaune Ajouter 18 ml de tampon phosphate Ajouter 10 ml de solution neutralisante Ajouter 18 ml de tampon phosphate Centrifugation 20 minutes à 3500 tours / minute  *Décanter, Vortexer . Effectuer un étalement sur lames pour l’examen direct . *Reprendre le culot avec 0,2 à 0,5 ml de tampon phosphate pH 6,8 (volume pouvant varier en fonction du nombre de tubes à ensemencer ). *Ensemencer la totalité du culot à raison de 0,2 ml maximum par tube .

CULTURE MILIEUX SOLIDES: Lowenstein Jensen: méthode de référence Coletsos: pyruvate glycérol Mycobactéries exigentes/ M.bovis, M.xenopi… Middelbrook 7H11 Résultat: 10 – 60 j

Bovis canetti africanum tuberculosis

Photochromogène shulgaii/T° gordonae scotochromogène

CULTURE EN MILIEU LIQUIDE AUTOMATISEE BacT \Alert (BioMérieux): mesure colorimétrique/CO2 BACTEC-MGIT(BD): Détection d’un complexe fluorescent après réduction de la tension d’O2 MB Redox (Biotest): mesure colorimétrique / système redox des mycobacteries.

CULTURE EN MILIEU LIQUIDE AUTOMATISEE Lecture automatisée Résultat en 10- 14j Techniques associées à l’identification par sonde= réduction des délais du diagnostic.

SENSIBILITE DES METHODES DE CULTURE P. Idigora et coll SENSIBILITE DES METHODES DE CULTURE P.Idigora et coll. Eu J Clin Microbiol infect Dis 2000 19:350-4 METHODES M+ (%) M- (%) M+ et M- (%) Milieu liquide MGIT 960 95.5 88.4 93 L.Jensen 88.6 62.3 79.6 Coletsos 84.1 58 75.1 Middelb. 7H11 87.1 55.1 76.1 L.J+Colet+7H11 97.7 79.7 91.5

DELAIS DES DIFFERENTES METHODES DE CULTURE P. Idigora et coll DELAIS DES DIFFERENTES METHODES DE CULTURE P.Idigora et coll. Eu J Clin Microbiol infect Dis 2000 19:350-4 METHODES M+ (J) M- (J) M+ et M- (J) Bactec MGIT 960 11 16.1 12.7 L.Jensen 21.4 26.7 22.8 Coletsos 21.3 26.8 22.7 Middelb. 7H11 10.4 20.7 13 L.J+Colet+7H11 12.2 23.3 15.5

IDENTIFICATION Identification classique: 3 - 4 semaines Temps de croissance Morphologie des colonies pigmentation caractères biochimiques

CARACTERES DIFFERENTIELS Catalase 22 68 ºC Niacine Nitrates PNB TCH M.tuberculosis M. bovis M. africanum M. Atypiques + - + - + - + + + - d S R

ANTIBIOGRAMME Méthode des proportions Milieu solide LJ Milieu liquide Longue, fastidieuse  laboratoire de référence

ANTIBIOGRAMME: METHODE des PROPORTIONS Apprécier le % de mutants R  au sein de la population bacillaire et de le confronter à 1 proportion dite «critique» de ces mutants N(%)= Nbre de colonies sur milieu +ATB Nbre de colonies sur milieu Témoin ATB CC° critique Proportions (mg/l) sur LJ critiques (%) INH 0,2 1 Rif 40 1 Emb 2 1 Sm 4 1 N > % critique souche R N < % critique souche S

DELAIS MOYENS DES METHODES CLASSIQUES Microscopie + Microscopie - L.J Culture 30j 20j ID + ATB 50j 60j Liquide +Automate 10j 15j ID+ ATB 20j 24j

CONCLUSION Maladie très grave, très contagieuse Diagnostic rapide+++ Peu sensible Microscopie rapide Biologie moléculaire Culture sensible Lente Tuberculose /HIV Mycobactéries atypiques Identification Détection rapide des résistances Tuberculose MDR

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIQUE DE LA TUBERCULOSES L. SLIM-SAIDI Laboratoire de microbiologie hôpital A.Mami de l’Ariana

Nefertiti Amenophis IV

INTRODUCTION Tuberculose: T.B active 1/3 population mondiale 8 millions de Nv cas / an Afrique 80% des cas 3 million de morts /an SIDA

Les 10 causes de mortalité les plus fréquentes 1990 2020 1 Infections respiratoires Maladies cardiaques 2 Diarrhées Dépression sévère 3 Complications naissance Accidents circulation 4 Dépression sévère Attaque (AVC) 5 Maladies cardiaques Maladie pulmonaire chronique 6 Attaque (AVC) Infections respiratoires 7 Tuberculose Tuberculose 8 Rougeole Guerre 9 Accidents circulation Diarrhées 10 Affections congénitales SIDA

Mycobacterium tuberculosis Bacille de Koch 1882 Principal agent de la tuberculose

MYCOBACTERIES Mycobacterium tuberculosis Tuberculose Mycobacterium bovis Mycobacterium africanum Mycobacterium leprae Lèpre Mycobacéries atypiques: M. kansasii gg, pneumopathies M. marinum ulc. cutanées M. scrofulaceum gg M. avium-intracellulare gg, pneumopathies M. fortuitum

CARACTERISTIQUES DES MYCOBACTERIES Bacilles aérobies strict, acapsulés, asporulés Difficile à colorer Paroi riche en lipides (ac.mycoliques, · Acido-Alcoolo-Résistance => BAAR · Résistance aux désinfectants, acides, bases, antiseptiques, antibiotiques · Résistance aux enzymes lysosomiales Multiplication lente: 18H (E.coli 20 mn) Culture 2 – 3 semaines et plus Multiplication intracellulaire (PN, macrophages)

CARACTERISTIQUES DES MYCOBACTERIES Absence de facteurs de virulence identifiés/capsule, toxine, enzyme, phagocyté par les macrophages et PN dès sa pénétration dans l ’organisme Parasite intracellulaire facultatif => HSR, tropisme lymphatique Formation d’un granulome dans l ’organisme avec caseification : Diagnostic histopathologique Mutants résistants « souches sauvages » varie selon l’antituberculeux(1/105 INH, Sm - 1/ 107 Rif) Antibiogramme, association obligatoire d’antiTBC

DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIQUE MICROSCOPIE CULTURE (Lowenstein Jensen) Identification Antibiogramme  Confirmation bactériologique tardive  Réduire délai de détection, d’identification RADIOMETRIQUE (BACTEC) NON RADIOMETRIQUES (MGIT – MB redox) HYBRIDATION AMPLIFICATION GENIQUE / PCR

PRELEVEMENTS Tuberculose pulmonaire Crachats : matin au réveil Tubages gastriques Aspirations bronchiques Lavages broncho-alvéolaires Tuberculose extra-pulmonaire Liq.pleural /biopsie pleurale LCR Urines Liquides de ponction : ascite, péricardique, articulaire Hémocultures Ganglions

PRELEVEMENTS Prélèvements répètés 3 j de suite: - Afin d’accroître les chances de mise en évidence des bacilles, l’émission du BK dans les liquides biologiques étant intermittente. - Avant la mise en route de l’antibiothérapie. Dans les formes pulmonaires première expectoration émise le matin. tubage gastrique réalise le matin des le réveil. Aspiration bronchique par fibroscopie . Dans les formes extra pulmonaires: LCR, sang, ponctions, biopsies, Urines

DIAGNOSTIC de la TUBERCULOSE MICROSCOPIE

EXAMEN MICROSCOPIQUE: Coloration de Ziehl-Neelsen 3 étapes: Coloration à chaud/ fuschine phéniquée Décoloration: acide /alcool Contre coloration: bleu de méthylène Lecture: microscope (x100)- 20’

EXAMEN MICROSCOPIQUE: Coloration à l’auramine Technique dérivée Lecture microscope à fluorescence (x25)- 5mn Résultat positif  confirmer par un Ziehl

MICROSCOPIE Méthode directe, simple, peu coûteuse. Détection rapide (< 1H) Etape essentielle diagnostic des TBC bacillifères, contagieuses.

MICROSCOPIE QUANTITATIVE Gravité de la tuberculose Evolution sous traitement

Microscopie quantitative et concentration bacillaire : Nombre de BAAR Réponse Cc de BAAR /ml crachat %crachat + 0 sur 300 champs - 100 à 1000 10 – 30 1 – 2 / 300champs + à contrôler 1 – 10/ 100 champs 1+ 2000 à 10 000 50 – 58 1 – 10/ 10 champs 2+ 30 000 à 50 000 90 – 96 1 – 10 / champ 3+ 100 000 95 – 100 10 ou plus / champ 4+ 300 000 à 500 000 ou + 99 - 100

EXAMEN MICROSCOPIQUE Non spécifique: BAAR Sensibilité: 5 103 à 104 bacilles /ml de produit => 1 BAAR sur le frottis 10 bacilles => infection

PERFORMANCE de la MICROSCOPIE Sensibilité % Spécificité VPP Levy (1989) Gordin (1990) Kramer*1990 Kim 1984 Greenbaum 1980 Klein 1989 53.1 45.7-55.3 61 74.4 32-52 45* - 81 99.8 > 99 - 98.5 91.5 - 98

MICROSCOPIE Tuberculoses pulmonaires Tuberculoses extra-pulmonaires Adulte 60 - 80% Enfant <20% HIV 40-50% Tuberculoses extra-pulmonaires M+ 10 - 40%

PRELEVEMENTS Prélèvements répétés 32-81% Tubages gastriques 10-34% Examen de 3 frottis améliore la sensibilité de la technique Tubages gastriques 10-34% Expectoration provoquée 87% Prélèvements endoscopiques 32-48% Aspiration 79% Brossage 20- 62.5% Biopsies 28-50% Crachats en postfibroscopie 5-21%

DIAGNOSTIC de la TUBERCULOSE CULTURE

CULTURE sur milieu de Lowenstein-Jensen Technique de référence : Moyen de diagnostic sensible ( 50 - 80%) Améliore les résultats de l’examen direct  Isolement de la mycobactérie  Identification  Antibiogramme  Epidémiologie  Critère de guérison (négativation ultérieure) Inconvénient: Lenteur : 21- 28 jours - 2mois

CULTURE Traitement des échantillons : Prélèvements polymicrobiens: fluidification + décontamination Prélèvements monomicrobiens: lyse concentration, centrifugation

LAURYLSULFATE DE SODIUM N-Acétyl-L-Cystéine Soude   DECONTAMINATION-FLUIDIFICATION   METHODES LAURYLSULFATE DE SODIUM Tacquet et Tison SOUDE Petroff CHLORHEXIDINE N-Acétyl-L-Cystéine Soude Kubica Prélèvement 2 ml maximum Homogénéisation Et Décontamination     Ajouter 3 ml de Laurylsulfate de sodium Vortexer Agitateur de Kahn pendant 30 minutes Ajouter 2 ml de soude à 4 %  Vortexer Placer à 37°c pendant 20 minutes + si le prelevement n’est pas correctement fluidifie Ajouter 2 ml de dithiothréitol Agitateur de Kahn 15 minutes Ajouter 6 ml de chlorhexidine à 1% Agitateur de Kahn pendant 15 minutes   Ajouter 2 ml de la solution : Soude/citrat+ N-Acétyl-L-Cystéine 0,5% Agitateur de Kahn 20 minutes Neutralisation Ajouter la solution neutralisante jusqu’à virage au jaune Ajouter 18 ml de tampon phosphate Ajouter 10 ml de solution neutralisante Ajouter 18 ml de tampon phosphate Centrifugation 20 minutes à 3500 tours / minute  *Décanter, Vortexer . Effectuer un étalement sur lames pour l’examen direct . *Reprendre le culot avec 0,2 à 0,5 ml de tampon phosphate pH 6,8 (volume pouvant varier en fonction du nombre de tubes à ensemencer ). *Ensemencer la totalité du culot à raison de 0,2 ml maximum par tube .

MISE EN CULTURE 2 tubes de L-J sont ensemencés pour chaque échantillon. Tubes incubés à 37C, inclinés et légèrement débouchés. Lecture:3emej (éliminer les tubes contaminés) Lecture chaque semaine, puis tous les 15 j. Réponse quantitative au 28eme j. Contrôle au 48eme j, 60eme j et au 3eme mois.

CULTURE AUTRES MILIEUX DE CULTURE: =>Milieu Coletsos: M.bovis. =>Milieux géloses: Middelbrook 7H10 - 7H11. =>Milieux mixtes =>Milieux liquides  AUTOMATES

METHODES RADIOMETRIQUES (BACTEC) Mesure le 14CO2  à partir d’une culture contenant de l’acide palmitique radioactif. Détection précoce de la croissance: 10–18j M.tuberculosis Avantages : rapide Sensible Recherche des mycobactéries dans les p.pathologiques/  Sang, ponctions, crachats décontaminés Sensibilité aux antibiotiques Inconvénients : Appareillage coûteux ( 6x méthode classique ) Coût de fonctionnement Produits radioactifs : contrainte de livraison, de stockage et d’élimination

METHODES NON RADIOMETRIQUES Nouveaux systèmes : BACTEC-MGIT(BD): Détection d’un complexe fluorescent après réduction de la tension d’O2 BacT \Alert (BioM): mesure colorimétrique/CO2 MB Redox (Biotest): mesure colorimétrique / système redox des mycobacteries. Techniques associées à l’identification par sonde => réduction des délais du diagnostic.

SENSIBILITE DES METHODES DE CULTURE P. Idigora et coll SENSIBILITE DES METHODES DE CULTURE P.Idigora et coll. Eu J Clin Microbiol infect Dis 2000 19:350-4 METHODES M+ (%) M- (%) M+ et M- (%) Bactec MGIT 960 95.5 88.4 93 L.Jensen 88.6 62.3 79.6 Coletsos 84.1 58 75.1 Middelb. 7H11 87.1 55.1 76.1 L.J+Colet+7H11 97.7 79.7 91.5

DELAIS DES DIFFERENTES METHODES DE CULTURE P. Idigora et coll DELAIS DES DIFFERENTES METHODES DE CULTURE P.Idigora et coll. Eu J Clin Microbiol infect Dis 2000 19:350-4 METHODES M+ (J) M- (J) M+ et M- (J) Bactec MGIT 960 11 3 - 39 16.1 7 - 34 12.7 3 – 39 L.Jensen 21.4 6 - 60 26.7 14- 66 22.8 6 - 66 Coletsos 21.3 26.8 11 - 60 22.7 6 – 60 Middelb. 7H11 10.4 3 - 35 20.7 10 - 47 13 3 - 47 L.J+Colet+7H11 12.2 23.3 15.5

IDENTIFICATION Etiologies: M. tuberculosis; M. atypique Identification classique: 3 - 4 semaines Temps de croissance Morphologie pigmentation caractères biochimiques Identification par sondes nucleiques Spécifique, rapide < 2H Non applicable sur les produits pathologiques ( > 104 bactéries/ml)

IDENTIFICATION : Mycobactéries Catalase PAS TCH NIACINE ADN 22°C 68°C M. tuberculosis + - S R + + M.atypiques ++ + R S - -

AUTRES METHODES DE DIAGNOSTIC

METHODES CHIMIQUES Profil des acides mycoliques (HPLC): Spécifique, peu sensible 2.5 106 bactérie\ml Matériel coûteux Détection de l’acide tuberculostearique (CPG-SM): Très sensible =>Echantillons cliniques, rapide. Réaction croisée. Coûteuse, peu adaptée a la routine.

SEROLOGIE Technique immunoenzymatique:ELISA A 60 Détection des anticorps IgG,IgM,IgA Peu spécifique ( faux négatifs et faux positifs ) Peu sensible (< 60% ) Antigènes spécifiques de M. tuberculosis: LSD, DAT, PGLTb1=> Spécificité de 98%, sensibilité de 50-60% ( 70% en cas d’association) Pas de distinction entre tuberculose guérie ou tuberculose évolutive

Pas de sérodiagnostic pour la TBC Aucun sérodiagnostic ne permet actuellement de porter le diagnostic d’une tuberculose

Sensibilité aux antituberculeux milieux solides (plusieurs semaines) milieux liquides (plus rapide) recherche de mutations par PCR ou puces à ADN (rifampicine)

Test tuberculinique protéines de M. tuberculosis administration intradermique de 10 UI lecture à 72 h diamètre d’induration > 5 mm

Test tuberculinique négatif : positif : vaccination par BCG sujet a été en contact et a développé réponse immunitaire T-dépendante vaccination par BCG augmentation franche  infection par BK ? négatif : pas d’infection phase initiale de primo-infection rougeole déficit immunité cellulaire

Diagnostic anatomopathologique Nécrose caséuse fragment biopsique muqueuse bronchique plèvre foie ganglion lésions typiques : granulome BAAR

CONCLUSION Microscopie: outil de base dans la lutte anti-tuberculeuse Culture: Méthode de référence: souche; ATB; épidémiologie Test rapide et sensible =Diagnostic des tuberculoses paucibacillaires; extrapulmonaires

BIOLOGIE MOLECULAIRE SONDES NUCLEIQUES AMPLIFICATION GENIQUE Puce à ADN

Diagnostic tuberculoses extrapulmonaires

CONCLUSION Les nouvelles techniques actuellement proposées pour le diagnostic de la tuberculose, présentent certes un certains nombres d’avantages, contournant les difficultés rencontrées avec les méthodes classiques; mais aussi des inconvénients ( coût, contraintes, manque de recul, faux négatifs et faux positifs ),constituant des limites a leurs installation en routine. Elles restent toujours a confirmer par la culture classique.

ANTISEPTIQUES - DESINFECTANTS ET MYCOBACTERIES Antiseptique Activité Alcool 70° ++ Aldéhydes ++ Ammoniums quaternaires 0 Chlorhexidine 0 Chlore ++ Iode ++ Iodophores + Hexachlorophène 0 Dérivés mercuriels 0

MICROSCOPIE Tuberculoses pulmonaires Tuberculoses extra-pulmonaires Adulte 60 - 80% Enfant <20% HIV 40-50% Tuberculoses extra-pulmonaires M+ 10 - 40%

MICROSCOPIE Tuberculoses pulmonaires Tuberculoses extra-pulmonaires M- C+ 20 - 30% M- C- 10 - 20% Tuberculoses extra-pulmonaires M+ 10 - 40% M-/+ C+ 30 - 90% M- C- ?

CARACTERES DIFFERENTIELS PNB Catalase 22 68 ºC Niacine Nitrates TCH M.tuberculosis M. bovis M. africanum M. Atypiques S R + - + - + - + + + - d

METHODES D’AMPLIFICATION GENIQUE Réaction de polymérisation en chaîne: (PCR) Réaction Amplification-ligation:(LCR) Réaction Amplification-transcriptionnelle: (TMA) Réaction Amplification-displacement: (SDA) Sondes specifiques: 65KD, MPP64, IS 6110, 16S rARN Méthodes de diagnostic et d’identification directes, rapides. Spécifiques 97-98% Sensibilité varie en fonction du résultat de la bascilloscopie

INTRODUCTION Tuberculose: Problème majeur de santé publique. Morbidité, mortalité importante, pays en voie de développement. OMS (Avril 2001) 2.109 personnes infectées. 5 – 10% =>tuberculose. Risque augmenté HIV. Apparition de souches résistantes et multirésistantes. TUNISIE: décroissance régulière depuis 1960. En 2000 l’incidence est de 21cas \ 100.000 habitants.

DIAGNOSTIC de la TUBERCULOSE Microscopie Culture Autres Méthodes Culture en milieu liquide et détection radiométrique/colorimétrique Chimique Moléculaire: PCR

NOUVELLES TECHNIQUES DE DIAGNOSTIC RAPIDE - Détection rapide de la croissance par technique radiométrique et non radiométrique. - Détection de constituants spécifiques par méthodes chimiques. - Détection d’anticorps par méthodes immunologiques - Biologie moléculaire