metafer® de la société mEtasystem Chercheur de Métaphases au CHU de REIMS metafer® de la société mEtasystem

Organisation du laboratoire de cytogénétique et génétique du CHU REIMS Secteur constitutionnel , hématologique et fish (4,5 techniciennes) En 2009: 600 caryo constit métaphasiques /prométaphasiques 800 caryo hémato 1100 FISH hémato et constit Secteur prénatal et tumeur (1,8 techniciennes) En 2009 : 900 caryo Secteur BM (1,5 techniciennes + 1 ingénieur « puce CGH array »)

Évolution des caryotypes en 5 ans hématologie FISH constitutionnel 2004 500 720 690 2009 800 1100 600 évolution 60% 53% 15%

Equipement et imagerie Un chercheur de métaphase + chargeur 80 lames 4 microscopes « captures manuelles » + logiciels d’analyse d’images Ikaros® et Isis® 2 microscopes lecture de FISH « captures manuelles »équipé d’une platine de relocalisation de mitose

Utilisation du Métafer® Tous les caryo hémato bandes G et R 80% des lames de FISH (métaphasique et interphasique), sondes commerciales, bac. Peu de caryo constitutionnels…

Station metafer® + chargeur 80 lames ( 2m10 en longueur x 80 cm en profondeur)

Temps de capture Plateau de 8 lames en lumière blanche Recherche des mitoses obj x10 Choix des mitoses + autocapture à l’obj x60 Transfert des images ± 1h30 FISH métaphasique De 10 min à 30 min / lame en fonction du nombre de mitoses voulu FISH interphasique ± 30 min / lame (pour une recherche min de 200 à 300 noyaux)

Entrées des dossiers

Paramètres de calibration et d’entraînements des lames Création de programmes de recherches Recherche obj x10 , détection des mitoses Lames bandes G et R (classifiers hémato, constit, LA ,etc…) Lames de FISH (dapi) Autocapture obj x63 : relocalisation des mitoses ≠ classifiers pour les mitoses très étalées (HRC) Classifiers pour les différents types de fluorochromes en FISH

Création de programmes de recherches FISH interphasique (objx40) Types de cellules à détecter (lymphocytes , LCR ,cellules buccales ) Sondes monolocus monocolore ou bicolore (break- appart) Sonde de fusion Type de fluorochrome

Paramètres variant en FISH interphasique Sensibilité (seuil de détection) Largeur des spots Limite d’espacement entre 2 spots d’une sonde bicolore (impliquant ou non une translocation ou une inversion) Nombre de champs à screener Prise en compte ou non des noyaux avec 0 spot (double délétion)

MLL IGH

Clone 1 Clone 2 Clone 3

AVANTAGES Moins de lecture au microscope et dégagement de temps souplesse d’organisation au microscope Sensibilité et détection ++ Souplesse d’utilisation pour les confirmations de petits clones hématologiques ++ Possibilité de relocaliser facilement des mitoses Rendu plus rapide des caryo hémato « screenés »  le jour même de la coloration

AVANTAGES Utilisation du chargeur de lames la nuit notamment en FISH interphasique (30 min /lame) Choix de la zone de lecture notamment en FISH (plusieurs sondes sur une lame) Lecture « rapide » des M-FISH Programmes adaptés aux ≠ sondes (sonde de fusion ,M-FISH , type de fluorochrome) Compte rendu d’analyse précis en FISH interphasique avec les ≠ clones hémato Toutes les recherches sont stockées dans le disque dur

INCONVENIENTS Plusieurs mois d’adaptation et de paramétrage Nécessité de mettre à jour les logiciels de traitement d’image sur chaque poste d’analyse Proximité de l’automate indispensable Qualité des étalements importante (étaleur) Huile +++ Mitoses incomplètes en constitutionnel et prénatal ++

INCONVENIENTS Difficulté d’interprétation pour certaines sondes Diagramme interphasique parfois assez fastidieux à corriger FISH ou lumière blanche prévoir une organisation au sein du labo

Après 2 ans d’expérience: conclusion Après 2 ans d’expérience: Devenu indispensable en cytogénétique hématologique et en FISH A optimiser pour nos caryotypes constitutionnels et prénatals