Identification moléculaire et étude de la sensibilité de candida parapsilosis, candida metapsilosis et candida orthopsilosis A. Ben hadj hassine1, 2,4*, F. Saghrouni2,4, M. Marzouk3,4, M. Ben said2,4, J. Boukadida3,4. 1Faculté de Pharmacie de Monastir. 2Laboratoire de Parasitologie-mycologie, CHU Farhat Hached Sousse. 3Laboratoire de Microbiologie et d’Immunologie, CHU Farhat Hached Sousse. 4Unité de recherche, UR12SP34, CHU Farhat Hached Sousse. *Correspondant : e-mail: benhadjhassine.ahmed@yahoo.fr / Tel: 40 143 343   Introduction : C. parapsilosis est un agent pathogène émergent dont la prévalence a considérablement augmenté au cours des deux dernières décennies. L’émergence de C. parapsilosis en pathologie humaine a suscité un grand nombre d'études portant sur sa virulence et son épidémiologie moléculaire. Mais aucune information n’est disponible en Tunisie. Notre étude est la première en Tunisie portant sur l’identification moléculaires et l’estimation des fréquences des 3 espèces au sien du complexe c. parapsilosis afin d’étudier leurs profils de sensibilité aux antifongique. Matériel et Méthodes : - Echantillon = 96 souches cliniques . Souches de référence : 2 souches de C. parapsilosis sensu stricto (ATCC22019, CECT13009), 1 souche de C. metapsilosis (CECT13010) et 1 souche de C. orthopsilosis (CECT13011). Identification moléculaire: PCR-RFLP du SADH ( gène codant pour l’alcool déshydrogénase) + PCR-RPSO multiplex ( gène codant pour la protéine ribosomal So 40s) + PCR-ITS ( gène 5,8 s flanqué par ITS1 et ITS2). Etude de sensibilité aux antifongiques : ATB Fungus 3 et E-test (caspofongine). Résultats : Sur 96 souches cliniques testées : 91 (94,8%) souches ont été identifiées comme C. parapsilosis sensu stricto 3 (3,1%) souches ont été identifiées comme C. metapsilosis 2 (2,1%) souches ont été identifiées comme C. orthopsilosis Figure 1: Résultats de la digestion enzymatique du produit de PCR-SADH des 5 souches cliniques par le BanI. M - marqueur de poids moléculaire 100 pb - Présence de 4 bandes de 370 pb, 188 pb, 93pb et de 60 pb pour la souche de référence C. metapsilosis CECT 13012 (1) et les 3 souches cliniques 2 à 4. - Présence d’une seule bande de 716 pb pour les souches cliniques 5 et 6. Figure 2: Résultats de l’amplification par la PCR-RPSO multiplexe des souches cliniques de 1 à 15. M- marqueur de poids moléculaire 100 pb, R1- C. parapsilosis CECT13009, R2- C. parapsilosis ATCC22019, R3- C. orthopsilosis CECT13011, R4- C. metapsilosis CECT13010, de 1 à 15 : souches cliniques. 17 souches sont testées pour la sensibilité aux antifongiques sont révélés sensibles : CMI de l’amphotéricine B, du fluconazole, de l’itraconazole et du voriconazole étaient basses. CMI de la caspofungine obtenues étaient élevées par rapport aux autres Candida sp. Conclusion : Fiabilité excellente des deux techniques PCR (PCR-RPSO et PCR-SADH) dans l’identification des espèces par comparaison à la technique de référence ; la PCR-ITS. PCR-RPSO multiplexe est mieux adaptée au contexte clinique ( simplicité + rapidité ). Les différences dans la sensibilité des souches des 3 espèces restent toutes relatives et ne nécessitent pas une identification systématique au niveau de l’espèce de toutes les souches cliniques au laboratoire.