BIO1540 Lab 3: Processus cellulaires chez Amoeba proteus

Objectifs Identifier, photographier et mesurer les organites présentes dans Amoeba proteus. Visualiser des processus cellulaires tels que le mouvement amiboïde, le cycle de la vacuole contractile et l’endocytose. Mesurer le diamètre de la vacuole contractile au cours de son cycle. Utiliser ces mesures pour tracer un graphique montrant la variation du volume de la vacuole en fonction du temps.

Méthode (mise en place) Connecter délicatement la caméra du microscope au câble de l’ordinateur. Nettoyer les surfaces optiques du microscope (lentille du condenseur, oculaires, objectifs et lampe) à l’aide de Kimwipes

Observations au Microscope Garder une intensité lumineuse relativement faible. Ne laissez pas la préparation sécher Ne touchez pas la lamelle couvre-objet

Partie I: Anatomie de l’amibe Identifiez les structures et organites présentes dans la liste « structures amibe » (LabWeb): Localisez une amibe sur votre lame en utilisant l’objectif 4x, puis passez au 10x puis au 40x pour observer les détails. Des questions sur l’anatomie de l’amibe seront posées pendant l’examen de laboratoire.

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Partie II: Mouvement Amiboïde Votre tâche: Sous l’objectif 10x, observez la formation et l’élongation d’un pseudopode. Passez au 40x et observez le flux de l’endoplasme granuleux. Regardez la vidéo sur le site Digizoo. Prenez des photos et faites des schéma, représentez le flux de l’endoplasme fluide par des flèches.

Partie II: Mouvement Amiboïde Astuces: Localisez une amibe sur la lame en utilisant l’objectif 4x. Fermez le diaphragme d’ouverture (sur le condenseur) vers la gauche pour augmenter le contraste (pas complètement ou l’image sera trop sombre). Passez ensuite à l’objectif 10X ou 40X pour observer l’amibe avec le niveau de détail désiré

Partie III: Cycle de la vacuole contractile Votre tâche: Mesurer le diamètre de la vacuole contractile (en µm) durant son cycle. Vacuole contractile (VC): Fonction: osmorégulation et élimination des déchets. Durée: environ 5 minutes à 20°C (cycle augmente avec la température). Emplacement: variable Composantes du cycle: Diastole: croissance continue Systole: expulsion du contenu dans le milieu extérieur.

Partie III: Cycle de la vacuole contractile

Partie III: cycle de la VC Systole t=5-8 minutes (300-480s*) t=30 s Pas de vacuole visible (diamètre=0) Diastole that fuse then suddenly a large vacuole appears. t=60-120 s Des petites vacuoles s’agrègent puis fusionnent. *Arrétez les mesures après 480s

Vacuole Contractile – Méthodes Identifiez une VC à l’objectif 10x. Passez à l’objectif 40x. Observez la VC pendant au moins un cycle complet avant de commencer les mesures. Le t=0 correspond au moment de la systole (=la vacuole disparaît).

Vacuole Contractile – Méthodes Photographiez la VC toutes les 30 secondes jusqu’à 480 secondes maximum. Sauvegardez vos images dans un dossier: K:/BIO1540/BIO1540XX au format JPEG Attention: sauvegardez vos images au fur et à mesure ou vous les perdrez Une fois les 2 cycles terminés, mesurez le diamètre en µm de la VC sur chaque photo Attention: pendant la phase de mesure, n’écrivez rien sur les moniteurs d’ordinateurs.

Vacuole Contractile – Méthodes Entrez vos données (2 cycles) dans le fichier Excel. Les diamètres seront convertis en volumes, et la moyenne et l’erreur-type seront calculés automatiquement sur la feuille Excel. Les données de la classe seront disponibles demain sur la page « Lab3 » du site web des laboratoire (PAS BBLearn)

Partie IV: Endocytose Démontez la lame contenant les amibes. Ne jetez pas la lame. Jetez les lamelles dans les béchers situés au centre des bancs. Allez à la station ‘endocytose’ (demandez à votre TA). Attrapez 1 ou plusieurs amibes dans le flacon et transférez-les dans la plaque multi-puits avec le minimum de liquide Ajoutez 2 gouttes de solution inductrice sur les amibes. Attendez 1-2 minutes. Transférez 1 amibe dans la lame “porte amibe”, placez une lamelle et observez la formation de canaux endocytiques sous le microscope (40X).

Budget-temps Quiz Lab3 – 10 minutes Présentation du laboratoire - 15 min. Observation des Amibes – locomotion – anatomie – 45 minutes Mesure de cycles de la vacuole contractile - 75 min. Endocytose – 10 min. Instruction pour le rapport / question / nettoyage des bancs et microscope – 10 min.

Rapport Lab3: Page de titre + Graphique Graphique: Tracez un graphique (nuage de points) représentant le volume de la VC (moyenne de la classe et erreur type) pendant 1 cycle (t=0 à 480 secondes). Utilisez les données combinées affichées sur le site web des labs. Suivez les instructions postées sur le site web, et l’annexe I du manuel de laboratoire. Utilisez du papier millimétré. Incluez une légende située sous le graphique (cf. manuel) Date de remise: Sections de la semaine 1: deux semaines après votre lab Sections de la semaine 2: 1 semaine après le lab. Les données combinées seront disponibles demain sur le site web des labs.

Rappels Pour ne pas perdre de points techniques: Rincez la lame « amibe » et remettez-la dans le plateau où vous l’avez prise. Jetez les lamelles dans le bécher prévu à cet effet. Effacez tous les fichiers que vous avez sauvegardés Nettoyez votre banc de travail Nettoyez les surfaces optiques du microscope si vous avez versé du liquide Montrez votre banc à votre Démonstrateur/trice avant de partir. N’oubliez pas: mini-quiz au début du lab4