Exemple de démarche d’une recherche expérimentale

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Transcription de la présentation:

Exemple de démarche d’une recherche expérimentale Jean Mantz Service d’Anesthésie Réanimation SMUR, INSERM U676 Hôpital Beaujon

Impact Factors 2001: Pain: 4,54 Anesthesiology: 3,38 Anaesthesia: 2,37 Anesth Analg: 2,27 Br J Anaesth: 2, 20

Pathophysiology of neuronal death: excitotoxicity VOCC Ca++ Ca/calmodulin kinase PKC NO synthase PLA2 Calpains Free radicals Lipid peroxydation DNA damage Proteolysis Cell death: AMPA-R Na+ NMDA-R Ca++ cAMP cGMP GLUm-R Ca++ stores PLC

Hypothèse de départ Le glutamate joue un rôle fondamental dans la mort neuronale ischémique Les anesthésiques volatils ont un effet neuroprotecteur in vitro et in vivo. Cet effet pourrait être transitoire et ne concerner que la mort neuronale par nécrose (non apoptotique).

Question Les anesthésiques préviennent-ils ou retardent-ils simplement la mort neuronale ischémique ?

But de l’étude Etudier les effets des anesthésiques (isoflurane) sur la mort neuronale retardée après lésion ischémique neuronale. Tester l’hypothèse d’une action sur la transmission glutamatergique (réduction)

Choix du modèle expérimental Destiné à répondre à la question posée (et non l’inverse!...) In vivo vs in vitro La culture de tranche organotypique d’hippocampe. Modèle in vitro Préserve les connexions physiologiques interneuronales Contient du glutamate Permet de tester des effets à long terme (plusieurs jours ou semaines)

Méthodes Durée de l’ischémie: 45 min Effets d’un Placebo (saline) vs MK 801 (10 µM) vs Isoflurane (1%, 30 min) sur la mort neuronale induite par l’ischémie ou une charge de glutamate

Pickard L et al. Neuropharmacology 2001; 41: 700-13

Sullivan BL et al. Anesthesiology 2002; 96: 189-95

Conclusion

Quelques commentaires Points faibles Points forts Les objectifs sont atteints Le choix du modèle La rigueur méthodologique La netteté des effets Les concentrations faibles d’isoflurane La concision de la discussion Absence de dose-réponse Absence de calcul de puissance Absence d’exploration de la mort apoptotique Limites du modèle: - pertinence clinique - durée d’observation

Severe incomplete cerebral ischemia (10 min)

Lecture critique d’un article scientifique: les points essentiels La question est-elle clairement posée? La méthode est-elle adaptée aux objectifs ? La population étudiée est-elle clairement identifiée ? La population témoin est-elle clairement identifiée ? La taille des échantillons est-elle adaptée ? Les variables analysées sont-elles clairement identifiées ? Le choix des variables est-il adapté aux objectifs ? La durée de suivi est-elle suffisante ? Les méthodes statistiques sont-elles appropriées ? Les résultats sont-ils présentés de façon claire, détaillée et objective ? Les conclusions sont-elles valides ? L’impact de l’article est-il réel ?