Performances du test « Ammonium quaternaire » dans l’exploration des chocs anaphylactiques aux curares F.Bienvenu, Y.Benoit, G.Proton, P.Rouzaire, MA.Guinand, J.Bienvenu Laboratoire d’Immunologie, Centre Hospitalier Lyon-Sud Service d’Allergo-Anesthésie - Hôpital Edouard Herriot Réunion UniHA 2 février 2010

Contexte Groupes « Ammonium substitué » des curares : principales structures antigéniques reconnues par les IgE des patients ayant présenté un choc aux curares Développement d’un nouveau « Cap Ammonium IV » par couplage de la morphine (avril 2009)

Pourquoi la Morphine? La structure de la morphine est constituée : - d’une partie cyclique hydrophobe d’un ammonium tertiaire hydrophile similaire à l’ion ammonium IV des curares Baldo et Fisher ont montré que :  l’ ammonium tertiaire de la morphine est la structure qui se lie le mieux aux IgE des patients allergiques aux curares  la morphine peut être utilisée pour détecter les IgE spécifiques des différents curares Fisher MM, Baldo BA. Immunoassays in the diagnosis of anaphylaxis to neuromuscular blocking drugs. The value of morphine for the detection of IgE antibodies in allergic subjects. Anaesth Intens Care 2000; 28:167–70.

OBJECTIFS de L’ÉTUDE : Evaluer la sensibilité/spécificité du « Cap Ammonium quaternaire » dans l’exploration des chocs anaphylactiques aux curares en comparaison avec les résultats obtenus avec le Cap Suxaméthonium

PATIENTS Etude rétrospective réalisée sur 20 patients ayant présenté un choc aux curares (grade 3 ou 4) : 14 femmes, 6 hommes (17 à 75 ans) caractère anaphylactique de la réaction objectivé par histamine/tryptase Diagnostic d’allergie aux curares confirmé par des tests cutanés positifs pour 19 patients Pour 11 patients : choc dû au Suxaméthonium Groupe contrôle : 20 chocs anaphylactiques (grades 2-3-4) à d’autres agents (latex, antibiotiques, bleu patente) tests cutanés aux curares négatifs

METHODES Détermination (ImmunoCAP 250, Phadia) IgE totales IgE spécifiques Suxaméthonium IgE spécifiques Ammonium IV (seuil de positivité des IgE spécifiques : 0,10 kU/L)

Résultats chez les 20 patients ayant présenté un choc aux curares IgE spécifiques Suxaméthonium IgE spécifiques Ammonium IV Moyenne 0,61 kU/L 1,73 kU/L Extrêmes < 0,10 – 5,17 kU/L < 0,10 – 9,29 kU/L

Sensibilité - Spécificité IgE spécifiques Ammonium IV IgE spécifiques Suxaméthonium IgE spécifiques Ammonium IV Sensibilité 52% 81% Spécificité 100% 85% * *2 patients présentent des IgE totales >1500 kU/L

A noter : Chez les patients allergiques au suxaméthonium : Meilleure sensibilité du Cap Ammonium IV (91% ) par rapport au Cap Suxaméthonium (45%)

Conclusion Le CAP Ammonium quaternaire : a une meilleure sensibilité que le CAP Suxaméthonium dans le diagnostic de l’allergie aux curares plus particulièrement dans l’allergie au Suxaméthonium Relance l’intérêt du dosage des IgE spécifiques dans l’allergie aux curares

Conclusions : Proposition d’outils biologiques à privilégier dans l’investigation des chocs anaphylactiques aux curares : Au moment du choc : IgE spécifiques Ammonium IV (FEIA) (à la place des IgE suxamethonium et tests RIA) pour imputer la responsabilité des curares dans la réaction Lors la consultation d’allergo-anesthésie : Tests cutanés et Tests d’Activation des Basophiles pour déterminer les réactions croisées

IgE spécifiques FEIA RIA Suxa Rocu Ammonium 4aire PAPPC-RIA Se=44% VPP=100% VPN=67% Se=83% Sp=68% VPP=71% VPN=42% Se=78% Sp=85% VPP=82% VPN=81% Se=72% Sp=95% VPP=93% VPN=78%

Partie 2 : étude des réactions croisées entre les différents curares : test d’activation des basophiles Figure 1: Basophil activation test. Gating region (A) is defined by cells expressing CRTH2 with low light scatterings. Then, among gated cells from (A), basophils were isolated after exclusion of Th2 cells on the expression of CD3. The positivity threshold was defined with the negative control, without any drug. All the results are expressed as percentage of CD203c positive cells among the basophil population. Positive control (anti-IgE) validates our experimental settings. Negative control (PBS) Positive control (anti-IgE) a. b. = 0,6 = 77 SSC A CD203c CRTH2 Suxamethonium (Célocurine®) Rocuronium (Esmeron®) = 69 = 0,9 Gated on A CD3 Basophils CD203c CRTH2

Laboratoire d’Immunologie CENTRE HOSPITALIER UNIVERSITAIRE LYON-SUD 165, Chemin du Grand-Revoyet 69495 PIERRE-BENITE cedex Hôpitaux de Lyon Laboratoire d’Immunologie Pr J. BIENVENU EUROBAT GROUP NMBDs protocol

Standardisation à l’échelle européenne du TAB aux curares : Une technique commune Flow2Cast (Bühlmann) Identification : CCR3+ / SSC faible Marqueur d’activation : CD63 La technique de notre laboratoire Identification : CRTH2+ / CD3- Marqueur d’activation : CD203c Test des 7 curares… : Suxamethonium Rocuronium Vecuronium Pancuronium Atracurium Mivacurium Cis-Atracurium … ainsi que d’un mélange de l’ensemble des molécules