Faculté Pharmacie de Lille Travaux Pratiques « Gestes de base » et « Spécifiques » étudiants de 2nd année Module de Biologie Cellulaire et Moléculaire Expérimenter une démarche de recherche….. étude de documents techniques et publications (lecture de l'anglais), rédaction de protocoles expérimentaux, manipulation de micro-volumes et utilisation d’appareils de laboratoire, intégrer le travail de plusieurs séances, lecture et restitution de résultats,

Une thématique commune à l'ensemble des séances ...... en 2003-04 : « Inflammation et agents anti-inflammatoires : Régulation de la voie NF-kB par l'aspirine et les corticoïdes ». L’histoire : Mise en culture d'une lignée cellulaire de monocytes (RAW264.7) Traitement des cellules par le LPS et les anti-inflammatoires Mise en évidence de l'induction de la réaction inflammatoire Etude de la répartition sub-cellulaire de NF-kB Quantification de l'expression génique de la NOS2

Visite du laboratoire de biologie cellulaire - INSERM U545 En Pratique : Visite du laboratoire de biologie cellulaire - INSERM U545 observation des cellules, comptages, notion d'ensemencement, milieux de culture, détermination de la concentration en protéines cellulaires... Travail théorique : Traitement des cellules par le LPS et les anti-inflammatoires préparation de milieux de traitement, calculs de dilutions, traitements, cotraitements... Mise en évidence de l'induction de la réaction inflammatoire notion de marqueur, dosage des nitrites dans les surnageants de culture (produit de la NOS2)... Travail théorique : Etude de la répartition sub-cellulaire de NF-kB notion de fractionnement cellulaire (séparation d’un broyat de feuille sur gradient de sachharose), et d’immuno- fluorescence (mise en évidence du noyau et des microfilaments en microscopie fluorescence (Hoescht et phalloidine-FITC) Quantification de l'expression génique de la NOS2 extraction d'ARN cellulaires et analyse par RT-PCR semi-quantitative de l'expression de la NOS2

Restitution des résultats, présentation d’outils …. • Compte-rendus sur un mode « cahier de paillasse » • Intégration des données dans une « publication scientifique » • Présentation d’outils informatiques (pubmed… primer design) • Elaboration d’un document pédagogique • Bilan