- l’expérience du laboratoire Biomnis Lyon - Apport de la cytogénétique dans le diagnostic des phases leucémiques des lymphomes de la zone marginale : - l’expérience du laboratoire Biomnis Lyon - ATC , Rouen , 24 Septembre 2011 M. Roumiguières, V.Goutaloy 1 1

Le diagnostic et le pronostic des SLP reposent sur: Les études cytogénétiques ont permis une grande avancée dans la classification des hémopathies lymphoïdes chroniques. Le diagnostic et le pronostic des SLP reposent sur: - les données cliniques -l’étude cytologique/histologique -l’étude immunophénotypique -l’étude cytogénétique www.biomnis.com

Diagnostic de certitude de la LLC Devant la présence d’un hyperlymphocytose (>5000/mm3) 1==> Etude cytologique du frottis sanguin : Cytologie typique de LLC : petits lymphocytes matures + ombres de Gümprecht 2==> Etude immunophénotypique : Monoclonalité + Score de Matutes LLC typique : score de Matutes > 3 LLC atypique : score de Matutes = 3 Score de Matutes < 3 = pas une LLC Immunophénotypage : Diagnostic de certitude de la LLC 3 3

Rôle « PRONOSTIQUE » de la CYTOGENETIQUE FISH CARYOTYPE www.biomnis.com

Oligonucléotides: [DSP30 (CpG stimulants)+ IL2] Culture en 72h + Oligonucléotides: [DSP30 (CpG stimulants)+ IL2] 5 5

Oligonucléotides: [DSP30 (CpG stimulants)+ IL2] Culture en 72h+ Oligonucléotides: [DSP30 (CpG stimulants)+ IL2] 6 6

Pour les scores de MATUTES ≤ à 3  Etude CYTOLOGIQUE : indispensable ex : Lymphocytes clivés et Lymphome folliculaire  Etude CYTOGENETIQUE : peut permettre de préciser le DIAGNOSTIC et le PRONOSTIC du lymphome malin non hodgkinien B. -cas de la translocation (14;18)(q32;q21) et lymphome folliculaire 7 7

CLASSICATION OMS DES LMNH-B 8 8

- le lymphome de type MALT (gastrique principalement) - 50 à 70% Parmi les LZM, 3 hémopathies bien distinctes sont identifiées en fonction des sites atteints : - le lymphome de type MALT (gastrique principalement) - 50 à 70% - le LZM splénique (S-MZL) – 20% - le LZM ganglionnaire (N-MZL) – 10% Ce sont généralement des lymphomes indolents du sujet âgé Prise en charge thérapeutique fonction de l'organe atteint :  Antibiothérapie (MALT), Splénectomie ZONE MARGINALE 9 9

DIAGNOSTIC HISTOLOGIQUE = DIAGNOSTIC DE CERTITUDE ... dans le cadre du LZM: DIAGNOSTIC HISTOLOGIQUE = DIAGNOSTIC DE CERTITUDE ... .... dans le cadre des phases leucémiques des LZM non MALT Le score de Matutes est souvent nul (=0) ou faible (groupe CD5-/CD10-) L’analyse cytologique de la prolifération lymphocytaire peut poser des problèmes diagnostiques (à l’exception des lymphocytes villeux)‏ EXISTE-T-IL UN AUTRE OUTIL DIAGNOSTIQUE ? 10 10

LZMLZM : Profils génétiques différents LZM - Malt LZM Splénique ou ganglionnaire Translocations réciproques Anomalies de nombre Gains et/ou délétions t(11;18)(q21;q21) API2 / MALT1 Translocations avec IGH en14q32 t(1;14)(p22;q32) – BCL10-IGH t(14;18)(q32;q21) – IGH-MALT1 t (3;14)(p14;q32)- FOXP1-IGH Trisomie 3 / 3q Del 7q Trisomie 18 Del 6q Trisomie 12 / 12q Del 8p www.biomnis.com

Comment poser un diagnostic de LZM ? Intérêt de la cytologie ? Oui si L.villeux Intérêt de l’immunophénotypage ? Matutes 0 à 2 et groupe CD5- / CD10- souvent insuffisant Intérêt de la cytogénétique ? Peut apporter une aide précieuse +++ 12 12

Experience de Biomnis sur 2009-2011 Etude de 3 cas cliniques et Experience de Biomnis sur 2009-2011 www.biomnis.com

Hyperlymphocytose à 14 G/l Cytologie atypique Lymphocyte B normal Hyperlymphocytose à 14 G/l Cytologie atypique 14 14

Phase leucémique de quel LMNH-B ? Immunophénotypage : Matutes < 3 (1/5)‏ Groupe CD5- / CD10- Phase leucémique de quel LMNH-B ? 15 15

Délétion de la bande 7q32 = commune à tous les LZM 46,XX,dup(1)(q12q44),del(7)(q31q35) Délétion de la bande 7q32 = commune à tous les LZM 16 16

Evolution en 2 clones: 1er clone : del (8)(p12) 4646,XX,dup(1)(q12q44),del(7)(q31q35),del(8)(p12) 17 17

46,XX,dup(1)(q12q44),del(7)(q31q35),der(8) t(8;12) (p12;q13) 2ème clone : der8 t(8;12)(p12;q13) = délétion 8p et trisomie 12q partielle 46,XX,dup(1)(q12q44),del(7)(q31q35),der(8) t(8;12) (p12;q13) 18 18

Hyperlymphocytose à 58 G/l, Cytologie atypique Lymphocyte B normal Hyperlymphocytose à 58 G/l, Cytologie atypique 19 19

Phase leucémique de quel LMNH-B ? Immunophénotypage : Matutes < 3 (0/5)‏ Groupe CD5- / CD10- Phase leucémique de quel LMNH-B ? 20 20

4747,XX,+12 21 21

4747,XX,i(8)(q10),+12.nuc ish(D12Z1x3,D13s319x2,D13S1020x2 = délétion 8p et trisomie 8q D12Z1 D13S319 D13S1020 4747,XX,i(8)(q10),+12.nuc ish(D12Z1x3,D13s319x2,D13S1020x2 22 22

Hyperlymphocytose à 33G/l Lymphocyte B normal Hyperlymphocytose à 33G/l Cytologie très évocatrice : Lymphocytes villeux 23 23

LZM splénique à lymphocytes villeux Matutes < 3 Groupe CD5- / CD10- LZM splénique à lymphocytes villeux 24 24

3’IGH IGH 46,XX,t(6;14)(p21;q32).nuc ish(IGHx2)(5’IGH sep 3’IGHx1) 5’IGH LSI IGH Dual Color, Break Apart Rearrangement 25 25

ETUDE RETROSPECTIVE DES PHASES LEUCEMIQUES DE LZM AU LABORATOIRE BIOMNIS 2009  2011 www.biomnis.com

17 cas identifiés : 7 hommes, 10 femmes Age moyen : 74 ans www.biomnis.com

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Au point de vue cytologique : ETUDE RETROSPECTIVE DES PHASES LEUCEMIQUES DE LZM 2009  2011 Au point de vue cytologique : Très grand polymorphisme de la cellule lymphomateuse, Hétérogénéité des données cytologiques dans 94 % des cas (sauf L.Villeux) Taille moyenne, Chromatine mature, parfois nucléolée, Noyau +/- régulier, Cytoplasme au contour +/- régulier et +/- abondant, Nucléole +/- visible, = MANQUE FREQUENT DE SIGNATURE CYTOLOGIQUE www.biomnis.com

Au point de vue immunophénotypique: ETUDE RETROSPECTIVE DES PHASES LEUCEMIQUES DE LZM 2009  2011 Au point de vue immunophénotypique: Score de Matutes Fréquence 35 % 1 2 30 % 3 0 % CD5 - / CD10 - dans 94% des cas ( 1 cas CD5+ = LZM/CD5+ ?) www.biomnis.com

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Au point de vue cytogénétique : Anomalies cytogénétiques en association ou non Fréquence +3,+18 24 % del (7)(q32q35) 21 % +3, del (7q) 18 % +3, ou +3q 12 % +3, +12 5 % 3+, iso8q ( = del (8p)),+18 +12, i(8)q (del (8p)) del 7,del(8p) +3, +18, del(14q) 1cas t (6;14) 1 cas www.biomnis.com

Chromosomes impliqués Fréquence 3 65 % 7 41% 18 29 % 8 23 % 12 11 % 33 33

Associations d’anomalies chromosomiques dans 76 % des cas. Anomalies cytogénétiques en association ou non Fréquence +3,+18 association isolée ou avec caryotype complexe iso8q, del6q, del14q,+18 38 % +3 ,del 7q association isolée ou avec caryotype complexe +3q, del6q, 23 % del 6q, del 7q, 15% +3, +12 8 % +12, i(8)q (del 8p) 8% del 7,del 8p Associations d’anomalies chromosomiques dans 76 % des cas. www.biomnis.com

Anomalies isolées dans 24% seulement des cas Anomalies cytogénétiques isolées Nombre de cas +3, ou +3q 2 cas del (7)(q32q35) 1 cas t(6;14) Anomalies isolées dans 24% seulement des cas www.biomnis.com

Nombre d’anomalies dans le LZM Fréquence 1 18 % 2 24 % 3 et > 3 58% www.biomnis.com

Pas de délétion ATM (caryotype et FISH) Pas de délétion 13q14 (caryotype et FISH) 2 délétions p53 dans notre série (11 % des cas) par iso (17q) => SEUL CRITERE PRONOSTIC PEJORATIF dans les LZM ? www.biomnis.com

perte gain Salido et al, Blood 2010 N = 330 Salido et al, Blood 2010

Chr 3 3q25  3q29 = région commune surreprésentée perte gain

= région commune délétée Chr 7 7q32.1-32.2 = région commune délétée Gènes candidats ??? perte gain

perte gain Chr 1 Chr 6 Chr 8 Chr 14 del(14q) ? réarrangement 14q32 ? dup(1q) ? del(6q) ? del(8p)/+8q? perte gain IGH Chr 1 Chr 6 Chr 8 Chr 14

Cytologie Diagnostic du LZM Immuno- phénotypage Cytogénétique 42 42

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