Cours de Bactériologie Faculté de Médecine de Fès Dr. Sylvestre Tigaud Laboratoire de Bactériologie Centre de Biologie Nord Hôpital de la Croix-Rousse CHU de LYON

Méthode d’étude des Antibiotiques Dr. Sylvestre Tigaud sylvestre.tigaud@chu-lyon.fr Tel : +33 4 72 07 18 44 Fax : +33 4 72 07 18 42 Hôpital de la Croix-Rousse

Etude de la sensibilité aux antibiotiques-1 (rappel) Base théorique : Détermination de la CMI : Concentration Minima Inhibitrice ; c'est la plus faible concentration capable d'inhiber toute culture visible de la souche. La CMI est comparée aux deux « concentrations critiques c et C » qui correspondent aux concentrations obtenues chez l’homme. Les limites c et C sont fixées par le Comité Français de l'Antibiogramme ou le NCCLS

Etude de la sensibilité aux antibiotiques- Bactérie résistante  CMI > C CMI plus élevée que les concentrations d'antibiotiques obtenues in vivo ; le traitement ne sera pas efficace Bactérie sensible CMI < c CMI nettement inférieure aux concentrations obtenues in vivo ; le traitement peut être efficace Bactérie intermédiaire c<CMI<C zone d'incertitude ; la bactérie peut être atteinte en augmentant la posologie Quotient inhibiteur : rapport entre concentration in vivo et CMI ; plus il est élevé, plus le traitement sera efficace (QI > 8)

Etude de la sensibilité aux antibiotiques-3 Antibiogramme (en pratique la mesure des CMI est réservée à des cas particuliers) Diffusion en milieu solide : méthode des disques (la mesure du diamètre d'inhibition reflète la valeur de la CMI) lecture automatisée désormais possible Dilution en milieu liquide : systèmes automatisés ; la lecture est automatisée et informatisée

Exemple d’un antibiogramme sur Acinetobacter

Diagnostic bactériologique direct 6 – Sensibilité aux antibiotiques Bactériostase et CMI La bactériostase est l'arrêt de la multiplication du germe, qui reste vivant, et donc susceptible de re-prendre sa multiplication si les conditions se modifient. La CMI, concentration minimale bactériostatique, est la plus faible concentration d'un antibiotique donné qui inhibe toute croissance visible en 24 heures.

Diagnostic bactériologique direct 6 – Sensibilité aux antibiotiques Bactéricidie et CMB La bactéricidie est la mort du germe, définitivement incapable de reprendre sa multiplication. La CMB, concentration minimale bactéricide, est la plus faible concentration d'un antibiotique donné qui ne laisse survivre que 1/10000 après 24 heures de contact.

Diagnostic bactériologique direct 6 – Sensibilité aux antibiotiques Bacteriostase et Bactéricidie Pas d’AB Bacteriostase Bactericidie

Méthode d’étude de l’activité des antibiotiques Détermination de la CMI Concentration Minimale Inhibitrice en milieu liquide ou solide Détermination de la CMB Concentration Minimale Bactéricide Antibiogramme par diffusion en milieu gélosé en milieu liquide (méthode automatisée) Avenir : Recherche de gène de résistance (sondes) ?

Méthode ATB Ensemencement des tubes 2 µg/ml 0.25 0.5 1 4 8 Témoin 24 h CMI Le premier tube sans culture visible donne la CMI Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO. S.J.R.T. H.C.R. 4/10/2017

Méthode ATB 0.25 µg/ml 0.5 µg/ml 1 µg/ml 2 µg/ml 4 µg/ml 8 µg/ml Témoin Méthode ATB CMI 24 h à 37°C La première boîte sans culture visible donne la CMB CMB Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO. S.J.R.T. H.C.R. 4/10/2017

CMI par dilution en gélose 0.25 µg/ml 0.5 1 2 4 8 Témoin La première boîte sans culture visible donne la CMI

Antibiogramme par diffusion Zones d’inhibition Antagonisme C A D B

Concordance Diamètres-CMI mm D d c C mg/l

Méthode automatisée à 2 points de mesure c C Sensible c C Intermédiaire c C Résistant

Etude des associations d’Antibiotiques Addition Indifférence Synergie Antagonisme