REGULATION DIFFERENTIELLE DES GENES HOX DANS L’ENDOMETRIOSE Delphine Héquet, Master 2 Reproduction et Développement, Paris 7 Institut Cochin, INSERM U1016, Daniel Vaiman, Bruno Borghese Service de Gynécologie-Obstétrique Saint-Vincent de Paul, Pr Chapron UMR 8104
ENDOMETRIOSE : pathologie métastatique bénigne 10 % des femmes en âge de procréer DOULEURS PELVIENNES CHRONIQUES ET INFERTILITE Théorie du reflux, Sampson 1927
GENES HOX ET ENDOMETRIOSE Puces à ADN 5600 genes dérégulés genes HOX-A et HOX-B réprimés genes HOX-C et HOX-D surexprimés Borghese et al, 2007
GENES HOX 39 GENES, 4 CLUSTERS A (chromosome 7) B (chromosome 17) C (chromosome 12) D (chromosome 2) Modèle d’expression des gènes HOX chez les mammifères. D’après Veraska et al. 2000.
OBJECTIFS ET METHODES 1- EXPRESSION DES GENES HOX PCRq et Western Blot 1-a Confirmation de la dérégulation : Endomètre eutopique et ectopique 1-b Nouvelle information : Endomètre témoin 2- LOCALISATION DES PROTEINES HOX Immunohistochimie Endomètre eutopique et ectopique Endomètre témoin 3- MECANISMES DE REGULATION : RECHERCHE D’ARN ANTISENS RT-PCR Spécifique
HYPOTHESE : ARN anti-sens CLUSTER HOX 5’ Gène 1 Gène 2 Gène 3 Gène 4 Gène 5 Gène 6 Gène 7 Gène 8 Gène 9 Gène 10 Gène 11 Gène 13 Gène 12 3’ 6
METHODES RT-PCR spécifique CLUSTER HOX A 5’ 3’ 7 Amorce(s) HOX A13
RESULTATS 1- EXPRESSION ARN : HOX A *** *** * * *** ** 2ΔCt témoin endomètre endométriome témoin endomètre endométriome 2ΔCt n=15 n=16 n=16 n=15 n=16 n=16 8
RESULTATS RESULTATS 1- EXPRESSION ARN : HOX C *** *** *** * ** 2ΔCt témoin endomètre endométriome témoin endomètre endométriome 2ΔCt n=15 n=16 n=16 n=15 n=16 n=16 9
RESULTATS RESULTATS 1- EXPRESSION PROTEINES 10
RESULTATS 2- LOCALISATION HOX A1 Témoin n=4 Endomètre n=4 Endométriome n=4 HOX A10 11
RESULTATS 2- LOCALISATION HOX C4 Témoin n=4 Endomètre n=4 Endométriome n=4 HOX C8 12
RESULTATS 3- MECANISME ARN ANTI-SENS n=3 CLUSTER HOX A 5’ 3’ 13 Amorce(s) n=3 13
DISCUSSION Confirmation d’une dérégulation des gènes HOX dans l’endométriose Expression opposée à celle du cancer de l’ovaire Existence d’un ARN antisens