6 sujets témoins (4 , 2 , BMI = 22 ± 1) Biopsies de muscle avant et après clamp hyperinsulinémique euglycémique 1 µg d’ARN total amplifié et marqué au Cy-5 (avant) ou au Cy-3 (après) Analyse de la fluorescence des lames Sélection des spots (signal 2.5 x bruit de fond) Normalisation des intensités de fluorescence Calcul des rapports (Cy5/Cy3) Analyse des données (Cluster Software) Comparaison des différentes lames Sélection des ADNc avec un signal dans les 6 expériences Analyse statistique des modifications d’expression Estimation du «  false-discovery rate (FDR) » Identification des gènes régulés 42557 39854 16140 762

Expression augmentée : n = 478 Diminuée : n = 284 Résultats : Expression augmentée : n = 478 Diminuée : n = 284 1- Enzymes 8- EST et inconnus 2- Récepteurs/transporteurs 3- Transcription/ Traduction 4- Signalisation 5- Cytosquelette/ trafic intracellulaire 7- autres 6- Ubiquitin / Proteasome

Insulin Glucose Transport Signaling Glucose Cytoskeleton Glucose-6P = number of up-regulated genes Insulin n = number of down-regulated genes Glucose Transport 12 5 Signaling Glucose Phosphatases 10 2 Cytoskeleton Hexokinase II 15 2 Kinases 6 3 cAMP pathway 4 1 Vesicle trafficking Glucose-6P 12 4 Carbohydrate metabolism 9 ATP Glycogen Pyruvate CO2 Respiratory chain Lipid metabolism 8 1 Lactate 8 2 O2 J. Biol. Chem, 2003

Insulin Post-translational modifications Translational regulation = number of up-regulated genes Insulin n = number of down-regulated genes Post-translational modifications Translational regulation 6 11 4 Ribosomal proteins 12 Proteins mRNA RNA splicing and transport Protein catabolism 11 5 Ubiquitin pathway 16 1 nucleus Proteasome 11 Other proteinases 5 7 Transcriptional regulation 30 18 J. Biol. Chem, 2003

Même étude chez les diabétiques de type 2 (5 sujets) : Sur les 762 ARNm cibles de l’insuline identifiés chez les témoins, 689 ont pu être analysés chez les diabétiques Régulation similaire aux témoins : 129 (98 augmentés et 31 diminués) Régulation inverse aux témoins : 119 (89 augmentés et 28 diminués chez témoins ) Absence de régulation : 442 gènes (345 augmentés dont HKII, p85aPI3Kinase, FAT/CD36 et 98 diminués chez témoins )

Diminution de la réponse à l’insuline ? Protéines Signalisation ARNm ? cytosol noyau Gènes affectés p85a PI-3Kinase Hexokinase II SREBP1c + Nombreux Autres !!

Mécanismes en cause ? Diminution de la réponse à l’insuline ? ? Protéines Signalisation ARNm ? cytosol noyau Gènes affectés p85a PI-3Kinase Hexokinase II SREBP1c Autres gènes… Mécanismes en cause ?

Diminution de la réponse à l’insuline ? Protéines Signalisation ARNm ? cytosol Etude des voies de signalisation de l’insuline noyau Gènes affectés p85a PI-3Kinase Hexokinase II SREBP1c Autres gènes… Etude des promoteurs et identification des facteurs de transcription