27 mars 2007 M1 UE Immunologie renforcée L’immunothérapie Camille Bellier Jonathan Chabout Yannick Elipot Céline Pellentz Marianne Simon 27 mars 2007 M1 UE Immunologie renforcée

Qu’est ce qu’un exosome? Exosomes et immunothérapie anti-cancéreuse Qu’est ce qu’un exosome? Introduction Exosome: petite vésicule (environ 90nm de diamètre) sécrété par différents types cellulaires, issu de la fusion des endosomes tardifs avec la membrane plasmique. Anticorps monoclonaux Composition: Protéines liées au cytosquelette, impliquées dans la transduction du signal, enzymes, hsp… +, dans les dexosomes: - Enrichis en CMH I et II Molécules costimulatrices des T (CD86 = B7.2…) Tétraspanines … Traitements immunosuppresseurs André et al, 2004 Vaccination thérapeutique Définition Cellules dendritiques Exosomes Conclusion  Les dexosomes contiennent toutes les molécules nécessaires à la fonction des DC. Existe thérapies anti-cancéreuses par injection de DC activées. Les Dex pourraient ils avoir le même effet (1996)?

Exosomes et immunothérapie anti-cancéreuse Les différentes étapes de mise au points d’un médicament comme celui-ci Introduction Étapes pré-cliniques Anticorps monoclonaux In vitro In vivo Traitements immunosuppresseurs Tests d’activation de LT humains Tests d’injection dans des Souris porteuses de tumeurs Vaccination thérapeutique Étapes cliniques Définition Cellules dendritiques Exosomes Phase I: faisabilité, effets secondaires Conclusion Phase II: effets,détermination dose optimale, posologie Phase III: test efficacité, comparaison avec traitements existants et/ou placebo Phase IV: suivi à long terme, état de tout traitement sur le marché

Pas d’activation directe des LT par les exosomes Peu importe le CMH de la cellule dend Bon CMH indisp sur exosomes Exosomes: HLA I / pept chargé Pept essentiel

Études précliniques: travail in vitro Exosomes et immunothérapie anti-cancéreuse Études précliniques: travail in vitro Introduction Anticorps monoclonaux Traitements immunosuppresseurs + LT8 Mart1-spé Sécrétion d’interféron γ ? Vaccination thérapeutique Définition Cellules dendritiques Exosomes Aussi test de lyse spécifique Conclusion CMH I A2+ CMH I A2- Mart1 = peptide tumoral Les exosomes rendent les DC compétentes pour l’activation des LT8 en leur transférant les protéines nécessaires André et al, 2004

Essai clinique: 2 phases 1 en 2005 Effets du traitements constatés: Exosomes et immunothérapie anti-cancéreuse Essai clinique: 2 phases 1 en 2005 Morse et al, USA Introduction Anticorps monoclonaux Escudier et al, IGR Traitements immunosuppresseurs Objectifs phase I: Faisabilité: OK, exosomes peuvent être produits à partir de patients atteints de cancers avancés comme à partir de porteurs sains. Tolérance: OK, peu d’effets secondaires, aucun grave (fièvre grade 1 chez quelques patients). Effets du traitements constatés: Régressions de la tumeur chez certains patients Pourtant, activation des LT faible ou nulle (présence de LT régulateurs? Patients immunodéprimés?) Observation d’une activation des NK (démontrée plus tard in vitro), infiltrent tumeur Vaccination thérapeutique Définition Cellules dendritiques Exosomes Conclusion Perspectives: Essais à poursuivre, résultats encourageants Tenter d’augmenter l’activation des LT (adjuvants, déplétion des LT reg…) Mieux comprendre le mécanisme impliquant l’action des cellules NK

Structure, caractéristiques les distinguant des polyclonaux Présentation des anticorps monoclonaux Structure, caractéristiques les distinguant des polyclonaux Introduction Anticorps monoclonaux Polyclonaux Définition Mode d’action Cytotoxique Modulateur Préciblage Agoniste/ antagoniste Schéma Ac? Explication avantage clonalité, decouverte… Traitements immunosuppresseurs Vaccination thérapeutique Conclusion Problématique,conclusion,etc…

Problématique,conclusion,etc… Présentation des anticorps monoclonaux Les différents types d’anticorps monoclonaux utilisés en immunothérapie Introduction Anticorps monoclonaux Polyclonaux Définition Mode d’action Cytotoxique Modulateur Préciblage Agoniste/ antagoniste Importance d’Ac humanisés, les différentes techniques pour y parvenir au cours du temps Traitements immunosuppresseurs Vaccination thérapeutique Conclusion Problématique,conclusion,etc…

Problématique,conclusion,etc… Diversité des modes d’action Introduction Anticorps monoclonaux Polyclonaux Définition Mode d’action Cytotoxique Modulateur Préciblage Agoniste/ antagoniste Cf. schéma M.A. Poulx Traitements immunosuppresseurs Vaccination thérapeutique Conclusion Problématique,conclusion,etc…

Immunosuppression anti rejet de greffe Rejet de greffe et traitements pour l’éviter Introduction Transplantation indiquée dans de + en + de cas (élargissement critères d’âge, diminution des contre-indications…) Anticorps monoclonaux MAIS Traitements immunosuppresseurs But Allergie Greffe Maladies autoimmunes Rejet des allogreffons 3 types de réactions de rejet: Hyperaigue: très rapide, surtout humorale, rare mais très violente, Aigue: quelques jours après, surtout cellulaire, nombreuses cellules T infiltrées, Chronique: mois ou années plus tard, répond très mal aux immunosuppressions. Vaccination thérapeutique Thérapies utilisées Conclusion Thérapies immunosuppressives Inhibition de l’expression de cytokines ex: corticoïdes, ciclosporine (anticalcineurine) Inhibition de l’action des cytokines ex: Ac monoclonaux anti-IL2 Inhibition prolifération cellules activées ex: Cellcept (antimétabolite), rapamycine (--| mTor) Pb: immunosuppression => fragilité accrue face aux infections

Le protocole empêche le rejet de greffe de cœur chez la Souris Immunosuppression anti rejet de greffe Un exemple de traitement en cours d’étude: activation des LT régulateurs Introduction Anticorps monoclonaux Etat actuel: étude pré-clinique sur modèle souris Thérapie: double injection d’anticorps anti-CD4 et d’antigènes du donneur Observation: prolifération de LT régulateurs CD4+ CD25+ Traitements immunosuppresseurs But Allergie Greffe Maladies autoimmunes Ac + Ag Ac seul Ag seul Vaccination thérapeutique Conclusion Le protocole empêche le rejet de greffe de cœur chez la Souris Buschell et al, 2005

Immunosuppression spécifique, n’affecte pas la réponse anti-virale. Immunosuppression anti rejet de greffe Un exemple de traitement en cours d’étude: activation des LT régulateurs Introduction Anticorps monoclonaux Traitements immunosuppresseurs But Allergie Greffe Maladies autoimmunes  Les LT issus des animaux traités présentent le même % de lyse spécifique que ceux des rats naïfs. Vaccination thérapeutique « ELISA »: cellules MDCK incubées avec extraits de poumon, puis fixées, Ac anti-HA, Ac II couplé HRP Conclusion  Ne reste pas plus de particules virales chez les animaux traités que chez les animaux naïfs. Buschell et al, 2005 Immunosuppression spécifique, n’affecte pas la réponse anti-virale.

BONUS

Bonus présentation des anticorps monoclonaux

Production d’Ac monoclonaux par la technique des hybridomes Immunisation d’un animal Prélèvement d’un clone de lymphocyte B de la rate Cellule de myélome fusion Sélection des hybridomes Production des Anticorps Purification des anticorps Utilisation des anticorps monoclonaux Isolement des hybridomes spécifiques de l’Ag Sélection des clones de meilleure affinité pour l’antigène

Bonus anticorps anti CD4 contre le rejet de greffe

Les Ac anti-CD4 permettent la production de cellules T FoxP3+ régulatrices

Mécanisme d’action des LT régulateurs CD4+ CD25+ CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells: from basic research to potential therapeutic use. C. Mottet, D. Golshayan

Bonus exosomes et immunothérapies anti-tumorales

Comparaison de la composition des dexosomes et des cellules dendritiques CMH I CMH II Chaine invariante

Test Souris: effet anti- tumoral d’un traitement à base d’exosomes 1998

Test in vitro: induction de la lyse spécifique de cellules de mélanome (FON) exprimant Mart1, par des LT CD8+ Ag de tumeur Dexosome de CMH I A2+ Ac anti HLA A2 André et al, 2004