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La greffe de CSH Moelle Osseuse La moelle osseuse est un tissu en renouvellement permanent situé dans les os. Production de 1012 cellules par jour (mille milliards!) Répartition : Crâne et mâchoire 13 % Membres supérieurs 8 % Sternum et côtes 10 % Vertèbres 28 % Bassin 34 % Membres inférieurs 4 % Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

Qu’est-ce que la moelle osseuse Un organe responsable de la production des éléments du sang . Les « cellules souches » donneront : Globules rouges Leucocytes Plaquettes Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

Schéma de l’hématopoïèse Cellules souches Progéniteurs Précurseurs Cellules matures Granulocyte Lignée myéloïde Monocyte Érythrocyte Mégacaryocyte/plaquettes Lignée lymphoïde Éosinophile Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin Lymphocytes B et T

Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin Définition Une cellule souche est la « cellule mère » non différenciée et pluripotente dont proviennent toutes les cellules sanguines Elle est capable d’une différenciation et d’un auto-renouvellement illimités Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

La greffe de moelle osseuse Deux grands types de pathologies : 1. production de cellules anormales : Leucémie aigue ou chronique Myélome Lymphomes 2. dysfonctionnement : Aplasie Déficits congénitaux Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin La greffe de moelle osseuse Particularités de la greffe de cellules de moelle osseuse Différent de la greffe d’organe : pas d’opération chirurgicale injection par voie veineuse comme une transfusion Mais problèmes immunologiques : rejet GVH (réaction du greffon contre l’Hôte) Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

Importance de la compatibilité tissulaire ( Human Leucocyte Antigens) La greffe de moelle osseuse Importance de la compatibilité tissulaire Typages HLA identiques du: ( Human Leucocyte Antigens) Donneur Receveur Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

La greffe de moelle osseuse Les donneurs potentiels : la fratrie : 25% des cas les donneurs volontaires de moelle osseuse la banque de sang de cordon Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin LE SYSTEME HLA Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

Le système HLA Découvert il y a 50 ans par Jean Dausset Human Leucocyte Antigen Complexe Majeur d ’histocompatibilité de l ’Homme Découvert il y a 50 ans par Jean Dausset « Carte d ’identité », exprimée à la surface de toutes nos cellules nucléées Polymorphe +++ Chaque sujet est unique Réalisation du typage HLA par prise de sang Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin LA COMPATIBILITE  Une étude de compatibilité nécessite : - La réalisation du TYPAGE HLA du patient et des donneurs - La COMPARAISON des typages HLA du patient et des donneurs - La RECHERCHE de l’identité tissulaire la plus proche, la plus parfaite. Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

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Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin Codominance: tous les gènes sont exprimés (2 Ag détectés par locus, hormis pour les homozygotes) - Transmission en bloc sous forme d’haplotypes (peu de possibilité de crossing over) Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

GENETIQUE DES POPULATIONS Grande diversité du système HLA Combinaisons préférentielles dans certaines populations Information sur l’histoire génétique de chaque population 4 grands groupes de POPULATIONS : CAUCASOÏDE NEGROÏDE MONGOLOÏDE AUSTRALOÏDE Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin Nomenclature des antigènes HLA Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

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Méthodologie de l’étude du système HLA: phénotypage: microlymphocytotoxicité (LCT) génotypage: résolution générique (2 digits): basse résolution résolution allélique (4 voire 6 digits): haute résolution (résolution intermédiaire: moyenne résolution) ->2 manières d’exprimer les spécificités HLA, avec des correspondances entre elles Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

Isolement des cellules mononucléées sur Ficoll PRINCIPE et RESULTATS L'isolement sur Ficoll repose sur les densités respectives des cellules et du Ficoll. Après centrifugation, les cellules mononucléées se rassemblent en un anneau opaque surnageant au dessus du Ficoll. Celui-ci est ensuite prélevé délicatement.                                                                                                                                                                            Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

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LA BIOLOGIE MOLECULAIRE appliquée au typage HLA Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin Cellule Chromosomes ADN La Biologie Moléculaire traite de la biologie des acides nucléiques Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin Structure de l’ADN Double hélice Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

A-T G-C Liaisons hydrogène (réversibles sous l’effet de la chaleur ou d’agents chimiques: dénaturation-hybridation) Liaisons phospho-diesters (l. irréversibles, catalysées par des enz DNA pol. ou nucléases) G-C Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin Principe de la PCR Matrice d’ADN Couple d’amorces spécifiques Taq polymerase, + dNTP Permet d’amplifier une zone spécifique sur un gène Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

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Migration de l’ADN chargé négativement en gel d’agarose Révélation par BET fluorescent qui s’insère dans la double hélice (intercalant) Identification en fonction du PM Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin

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DP DQ DR B C A Polymorphisme du système HLA : sérologie versus DNA HLA class II HLA class I DP DQ DR B1/B3/B4/B5 B C A antigènes 6 9 19 46 10 21 allèles (DNA) (>1700) 111 59 463 617 179 338 Réunion A.M.A.F. Bordeaux 1er mars 2008 Dominique FIZET Etablissement Français du sang Aquitaine-Limousin