PLACE DES AUTO AC DANS LE DIAGNOSTIC DES PATHOLOGIES AUTOIMMUNES Valérie GOUILLEUX-GRUART

MALADIES AUTO-IMMUNES (MAI) Maladies dues à l’action pathogène de Lc T et / ou Lc B spécifiques d’Auto-Ag MAI spécifiques d’organes (hépatites auto-immunes, pemphigus, myasthénie thyroïdites…) MAI non spécifiques d’organes (LED, PR, sclérodermie …..) MAI possiblement auto-immune (Sclérose en plaques, maladie de Crohn, rectocolite hémorragique….) Auto-Ac : Rôle pathogène / Témoin de la maladie ou conséquence

INTÉRÊTS DE LA RECHERCHE D’AUTO AC Marqueurs sensibles voire précoces de MAI Élément essentiel du diagnostic positif dans de nombreuses MAI Diagnostic différentiel des connectivites Caractérisation de formes cliniques particulières 180 spécificités antigéniques différentes 2 notions importantes SPECIFICITE SENSIBILITE

SPECIFICITE / SENSIBILITE... Ac « critère » diagnostique Ex : Ac anti centromère et CREST Ac anti cardiolipides et SAPL Ne veut pas dire forte spécificité (ACL dans SAPL + Lupus + Infections ….) Ac à valeur diagnostique élevée Ex : Ac anti MAG et neuropathie sensitive démyélinisante Ac anti-PR3 et maladie de Wegener Ac anti-Scl 70 Forte spécificité - Ac important pour le diagnostic mais peut être négatif Ex : Ac anti-DNA Ac anti-mitochondries de type 2 Ac anti-endomysium Ac sans valeur diagnostique Ex : Ac anti-fuseau mitotique Ac anti-bordure en brosse Ac anti-muscle strié ……..

RIA ou Radio Immuno Assay : Test de Farr Ac anti-DNA METHODES D’ETUDES IF ou Immunofluorescence directe (recherche de dépôts d’auto-Ac dans les tissus) IFI ou Immunofluorescence indirecte (cellules HEp2 : ANA, Ac anti-tissus..) Sérum du patient Cellules HEp2/ Coupe de tissus Ac de lapin anti Ig humaine conjugué FITC RIA ou Radio Immuno Assay : Test de Farr Ac anti-DNA

METHODES D’ETUDES (suite) Précipitation en milieu gélifié : recherche d’Ac anti-Ag solubles ou anti-ECT (Ouchterlony …) Témoin Scl70 Témoin SSA/SSB Antigènes Sérum n°1 Sérum n°2 Sérum n°3 Sérum n°4 ELISA : Ac anti-DNA, Ac anti-cardiolipides ou ACL, anti-MPO…. Ac anti Ig humaine marqué substrat Sérum du patient Ag

METHODES D’ETUDES (suite) Immunoblot / western blot : gp 210 … Agglutination : Test de Coombs Réaction de Waaler-Rose Test au latex INTERPRETATION DES RÉSULTATS Nature de l’examen (IFI, ELISA…..) Titre des Ac : Inverse de la dilution du sérum ou Unités arbitraires (seuil de positivité, variation d’une dilution…) Contexte clinique (Age, signes cliniques…..) Sensibilité / spécificité du marqueur Valeur diagnostique Suivi évolutif

AC ANTI-NUCLÉAIRES Ac anti-cytoplasme Enzymes : Hélicase, PCNA… topo isomérase 1 DNA histones Nucléole Actine Mitochondries Membrane nucléaire Enzymes : ARNt synthétases Ribonucléoprotéines

Cellules HEp2 Fluorescence Homogène

Cellules HEp2 Fluorescence Mouchetée

Cellules HEp2 Fluorescence Mouchetée

Cellules HEp2 Fluorescence centromérique

Cellules HEp2 Fluorescence Nucléolaire

Ac anti-mitochondries Cellules HEp2 Ac anti-mitochondries

Centromères : Fluo. Mouchetée particulière AC ANTI-NUCLÉAIRES Ac anti-cytoplasme Enzymes : Hélicase, PCNA topo isomérase (Scl70) … DNA histones Fluo. Mouchetée (en paquet) Fluo. cerclée Fluo. Nucléolaire Fluo. Homogène Centromères : Fluo. Mouchetée particulière Nucléole Polymerase 1 PM-Scl Actine Mitochondries Membrane nucléaire gp210, lamines Enzymes : ARNt synthétases Anti-Jo1…. Ribonucléoprotéines Sm/RNP SSA/SSB

Stratégie de dépistage des AAN (Laboratoire d’Immunologie, Amiens) IFI sur hep2 Dépistage 1/80 et 1/160 Stop (sauf cas particuliers) Négatif Positif >1/160 Anti-DNA ENA ELISA RIA Ouchterlony DOT, ELISA IFI anti-tissus anti-DNA anti SSA/SSB Scl 70, PmScl Sm/RNP Jo1, PL7, PL12 PCNA anti-actine anti- mito.

Fréquence des Ac anti-nucléaires dans différentes affections Pathologie AAN % LED 72-100 % PR 13-30 % PR + Sde Gougerot Sjögren 55 % Sclérodermie 40-80 % Poly et dermatomyosite 8-29 % Connectivites mixtes 100 % HCA 100 % Hépatite aiguë virale 17 % Sujets normaux 0.5 %

Principaux auto-Ac dirigés contre les composants du noyau ou du cytoplasme LED Sm (8-30 %),RNP (40 %), SSB/SSA (15-35 %) anti-ADN (60 %) Conn.Mixte RNP (95-100 %) SSB (11%), centromère (7%) Sclérodermie Scl70 (20-60%), RNP (12%) CREST centromère (70-90 %) Gougerot-Sjögren SSA/SSB (50-70 %) Polymyosite, Jo1, PM-Scl…. Dermatomyosite PR SSA/SSB(5-15 %), RNP (3%) Anti-DNA et lupus: Ac fréquents lors d’atteintes rénales Évolution plus grave Ac et suivi évolutif

Facteur rhumatoïde (FR) - Auto-Ac dirigés contre le fragment Fc des IgG. - Ac IgM le plus souvent mais également G, A, E - Population hétérogène d’Ac réagissant avec Ig humaines et Ig de diverses espèces animales. - Détection par Waaler-Rose et test au latex 2 types : FR monoclonaux LLC, Waldenström FR polyclonaux nombreuses situations normales et pathologiques Ac de faible spécificité FR % (IgM) PR 80 SS 60 LED 20 Sclérodermie 20 Dermato polymyosite 20 Polyarthrites chroniques 5 Infections virales 10 Dans PR Polyclonal souvent absent dans les PR débutantes Taux élevé et persistant : formes graves FR de type IgA : PR grave avec érosion osseuse Peut être négatif

Ac Anti-protéines citrullinées Facteur anti-périnucléaire : APF Ac anti-kératine : AKA Ac anti-Filaggrine : AFA Ac anti-peptide citrulliné cyclique : a CCP Citrullination : Arg citrulline Peptidyl arginine désiminase Ac de type IgG Spécificité > 95 % pour la PR Sensibilité : 50-60% non recouvrant avec le FR Apparition précoce : +++ dans PR débutante

Ac anti-phospholipides Famille très hétérogène d’Ac Ac anti-phospholipides proprement dits - anti-cardiolipides (aCL) de type IgG ou IgM (phospholipides anioniques ) - anti-phosphatidyl-éthanolamine, anti- phosphatidyl sérine Ac vis-à-vis de protéines régulatrices de la coagulation liées à des phospholipides 2 glycoprotéine 1, protéine S, prothrombine…. Anticoagulant circulant de type lupique (LA) Ac anti-mitochondrie de type 5….

Principales indications de la recherche d’ACL Antécédents de thromboses artérielles et veineuses Thromboses veineuses ou embolies pulmonaires récidivantes Premier épisode de thrombose veineuse de siége inhabituel ou chez un sujet < 50 ans Manifestations artérielles systémiques en l’absence de facteurs de risque < 50 ans Une (ou plus) mort fœtale Récidives d’avortements spontanés précoces Thrombopénie durable inexpliquée LED

Auto-Ac anti-cytoplasme des neutrophiles ANCA Auto-Ac anti-cytoplasme des neutrophiles cANCA : anti-Protéinase III …. Maladie de Wegener (75 %), Polyangéite microscopique cANCA en IFI pANCA : anti-MPO (myéloperoxydase) Polyangéite microscopique Syndrome de Churg et Strauss Maladie de Horton xANCA aspect pANCA, PMN fixés méthanol non dirigés contre la MPO RCH, Maladie de Crohn ……

HÉPATOPATHIES ET AUTO-AC Bilan hépatique perturbé Hépatite C Suspicion d’hépatite autoimmune Recherche d’Ac anti-tissus en IFI Ac anti-mitochondries de type 2 : Cible = Pyruvate déshydrogénase CBP +++, HCA + Ac anti-muscle lisse (anti-actine) : HAI de type I +++, CBP +, Hépatites virales, médicamenteuses Ac anti-LKM1 (liver Kidney microsome) : Cible = Cyt P450 HAI de type II +++, Hépatite C++, GVH, MAI diverses Ac anti-LC1

Ac anti Mitochondries (M2) Foie de rat Estomac de rat Rein de rat Ac anti Muscle lisse Estomac de rat

HÉPATOPATHIES ET AUTO-AC Ac anti-gp 210 (pore nucléaire) : CBP +++ Ac anti-lamines (env. nucléaire) : HAI, CBP, vascularite, cytopénie auto-immune Ac anti-SLA (soluble liver Ag)

Auto-Ac et Maladie cœliaque Ac anti-gliadine Ac anti-endomysium Ac anti-transglutaminase Ac anti-réticuline Recherche importante dans le diagnostic et le suivi de la maladie : le taux des Ac diminue sous régime sans gluten Ac anti-gliadine : Ac de type IgA et IgG Ac par ELISA Se. Sp. IgG 82 à 100 % 50 à 100 % IgA 52 à 100 % 65 à 100 % Ac anti-endomysium (IFI) : Ac anti-transglutaminase (ELISA) : Ac de type IgA, Sp. = 90 à 100 % Combinaison de 2 tests ~ 100 % de Sp. et Se. Attention au déficit en IgA