TD n° 3 LA MICROSCOPIE

La microscopie La microscopie est un ensemble de techniques permettant d'obtenir une image des structures biologiques. Le principe est dans tous les cas le même : une onde est envoyée sur la préparation ou émise par la préparation. Aujourd'hui la microscopie est divisée en deux grands groupes, différents par la nature de la particule élémentaire impliquée : Le microscope optique Le microscope électronique

1. La microscopie optique Le premier microscope fut sans doute fabriqué par Hans et Zacharias Janssen, deux fabricants de lentilles néerlandais, en 1590, mais le modèle final fut inventé par Antoine van Leeuwenhœk en 1664, puis fut amélioré par Christian Huygens. La microscopie optique regroupe: Le microscope à fond clair Le microscope à fond noir Le microscope à contraste de phase Le Microscope à fluorescence

1-1. La microscopie à fond clair Utilise des les rayons lumineux. Permet le grossissement de 1500-2000 fois. Épaisseur de coupe ( 1-5 µm). Observation vitale et colorée.

Microscope à fond clair Bactérie Protozoaire

1-2. La microscopie en contraste de phase Cette technique permet d'observer les cellules sans préparation ni coloration dans leur milieu d'origine. Le principe est basé sur le fait que les structures biologiques sont transparentes (n’absorbe pas la lumière transmise). Nécessite un éclairage très précis dite éclairage de Koehler. A l’observation, on voit une image en noir et blanc où les différentes structures apparaissent bordées de blanc d’un côté et de noir de l’autre.

Le microscope à contraste Culture cellulaire Le microscope à contraste de phase

1-3. La microscopie à fond noir Utilise les rayons lumineux dans un fond noir. Les zones de la préparation qui diffusent la lumière apparaissent lumineuses ( claires ) sur ce fond noir. Utilisé pour les éléments trop transparents. Les éléments observés apparaissent très brillants ( les flagelles, les fibres ). N'est pas utilisé pour l'observation d'objets colorés.

Le microscope à fond noir Bulles d'air dans l'eau Le microscope à fond noir Treponema pallidum Cryptococcus neoformans

1-4. La Microscopie à fluorescence Cette technique est utilisées pour certaines molécules qui émettent de la lumière quand on les éclaire avec une lumière de longueur d'onde supérieure. On éclaire l'échantillon avec une lumière ultraviolette, violette ou bleue. Consiste à utiliser une coloration fluorescente. Deux colorants très utilisés sont : la rhodamine (émet une lumière rouge) et la fluorescéine (lumière verte).

Le microscope à fluorescence Legionella pneumophila Culture cellulaire Legionella pneumophila

2. La microscopie électronique Il existe deux variantes de la microscopie électronique : La microscopie à transmission La microscopie à balayage

2-1. La microscopie électronique à transmission Utilise comme rayonnement des électrons. Observation sous ultravide. Permet le grossissement de 75000 – 5000000 fois. Les échantillons sont sous forme de lames extrêmement fines ( 50 nanomètre ). L'image obtenue peut être vue sur un écran. L'échantillon biologique apparaît plus clair que ce qui l'entoure, d'où le nom de coloration négative. L'échantillon apparaît blanc sur un fond sombre.

Le microscope électronique Bactériophage Le microscope électronique à transmission

2-2. La Microscopie électronique à balayage Utilise des électrons. Observation sous ultravide. Permet le grossissement de 75000 – 5000000 fois. Fournis des images en 3D. Permet l’observation des coupes d’une épaisseur de 300 – 600 A°.

Le microscope électronique Bifidobacterium adolescentis à balayage Bifidobacterium adolescentis