APPLICATION DES TECHNIQUES « IN SITU » (IMMUNO-HISTO-CHIMIE ET HIS) DANS LA PRISE EN CHARGE D’UNE TUMEUR DU SEIN Dr Olivier RENAUD Service d’anatomie-pathologique CHU POITIERS

Approche « théragnostique » Intérêt pronostique Décision thérapeutique Immuno-histo-chimie

Méthodes de détection : Immunohistochimie Hybridation in situ FISH CISH RT PCR et Elisa

Récepteurs hormonaux : semi-quantitative % de cellules intensité du marquage récepteurs oestro et progestéroniques marquage nucléaire

réc. œstrogène x 400

HER2 : définition Récepteur d'un facteur de croissance Human Epidermal growth factor Receptor-2 Glyco-protéine transmembranaire HER2 Famille des erbB tyrosine kinase Proto-oncogène c-erbB2 ou HER2-neu code pour le gène 185Her2 Chromosome 17q21

Intervient dans la régulation de la croissance, de la division et de la différenciation cellulaire Surexpression induit le maintien de son activation et la persistance des signaux vers le noyau pouvant entraîner dans certains cas une transformation maligne

Surexpression dans 20 à 30 % des cancers du sein Facteur de risque Traitement par trastuzumab (Herceptin)

chaque récepteur HER existe sous forme de monomère en équilibre avec des dimères qui sont stabilisés par un ligand. HER2 peut former des complexes soit avec lui-même (homodimères HER2/HER2), soit avec d'autres membres de la famille HER (hétérodimères en général HER2/HER3).

La protéine HER2 possède 3 domaines : 1) un site extracellulaire de fixation du ligand qui reçoit les signaux de l'extérieur 2) un petit segment lipophile transmembranaire qui transmet les informations à travers la membrane 3) une partie intracellulaire à activité tyrosine kinase qui active le signal de transduction du cytoplasme vers le noyau.

Application aux cancers du sein

Application aux cancers du sein

Application aux cancers du sein Les cellules normales possèdent 2 copies du gène HER2 et expriment un taux normalement bas de récepteur HER2 à leur surface. La surexpression de HER2 peut se faire par plusieurs mécanismes

Application aux cancers du sein Étude in vitro : Transfection de gène sur culture cellulaire

Application aux cancers du sein

Application aux cancers du sein

0 : Absence de marquage ou marquage membranaire < 10% 1+ : Marquage faible et partiel > 10% des cellules

2+ : Marquage membranaire faible ou modéré mais complet > 10% des cellules 3+ : Marquage membranaire fort et complet > 10% des cellules

Problème des scores 2+ : Nécessité de savoir s'il y a amplification génique ou pas Traitement uniquement des cas amplifiés 2 gènes par cellule, amplification à partir de 6 Méthode FISH ou CISH Possibilité de faire une recherche sur blocs paraffinés même anciens (sauf fixation par le Bouin) Détection du centromère 17 dans le même temps par FISH

2+

HER2 : Méthodes actuelles Approches morphologiques IHC FISH CISH visualisation des cellules portant le signal Approches sans contrôle morphologique Taux circulant d’ECD PCR

FISH Coupe fixée (pas Bouin !) Différents kits Pathvysion (2 sondes) Dako  (2 sondes) Inform® (1 sonde) Microscope à fluorescence Signal  avec le temps Pré-traitement Hybridation Interprétation

Les amplifications Augmentation du nombre de copies d’un gène sur le chromosome

≠ ANEUPLOÏDIE

Cas N°1 : Amplification HER2

Cas N°2 : Polysomie

Technique CISH Peut remplacer la FISH (concordante) HER2 gene Peut remplacer la FISH (concordante) Plateau technique plus simple Microscope optique Conservation des lames Kits commerciaux Zytovision-Clinisciences Zymed (Invitrogen) Accord européen en octobre 2005

Absence d’amplification Exemples de CISH Absence d’amplification Repérage au x20 Lecture au x40 >50% cellules tumorales (Zymed) Amplification Utiliser un contrôle positif à chaque manip+++

Corrélation/biologie moléculaire Sous-type luminal Sous-type HER2+ Sous-type basal-like Sous-type normal breast like Perou CM, Sorlie T, Eisen MB et al. Molecular portraits of human breast tumours. Nature 2000 ; 406 (6797) : 747-52

Sous-type luminal A et B Réceptivité hormonale forte CK8/18/19 et GATA RE alpha – exprimé dans le sous-type B A = monothérapie antihormonale B = + chimio

Sous-type HER2+ Associé à Ki 67 élevé Traitement par Herceptin

Sous-type basal-like RE/RP/HER2 négatifs Positivité de CK5/6 et EGFR Souvent mutation de BRCA1 Englobe carcinomes médullaires et carcinomes métaplasiques Traitement = taxanes ?

Limites de cette classification Reste des tumeurs inclassables (basal-like CK5/6 et EGFR -) Médullaire : bon pronostic alors que basal-like Sous-type luminal ne distingue pas les RP (RP- : anti-aromatase)

Nouvelles recherches Cellules cancéreuses circulantes sang moëlle osseuse Urokinase type activateur du plasminogène (uPA) et son inhibiteur (PAI1)

Nouvelles méthodes Outils « omics » Nanotechnologies génomique protéomique Nanotechnologies

Conclusion : Méthodes d’intérêt pronostique et thérapeutique. En pratique courante : Rec Horm et HER2 HER2 surexpression facteur de mauvais pronostic permet traitement par Herceptin toxicité d'Herceptin et coût très élevé du traitement imposent une méthode fiable de détection devant un score 2+, nécessité de rechercher une amplification génique (FISH ou CISH) sont traités les scores 3+ et 2+ amplifiés