(enzym linked immunoSorbent Assay) Le test E.L.I.S.A. (enzym linked immunoSorbent Assay) Le test E.L.I.S.A. est un test immunologique ; il permet de détecter des anticorps sécrétés en réponse à une infection. Il est utilisé pour le dépistage du SIDA avec un second test de confirmation par immuno-transfert (Western-blot)

(enzym linked immunoSorbent Assay) Le test E.L.I.S.A. (enzym linked immunoSorbent Assay) Nous allons détecter la présence d’anticorps anti-BSA ( Bovine sérum albumine) dans le sérum d’un lapin

La première étape : le « cotting » a été réalisée par le fournisseur; il s’agit de tapisser le fond des puits avec la BSA par effet électrostatique

Deuxième étape:on verse ensuite deux gouttes du sérum à tester dans le puits

On verse ensuite deux gouttes du sérum à tester dans le puits

On verse ensuite deux gouttes du sérum à tester dans le puits

Si le lapin est « contaminé », son sérum possède des anticorps anti-BSA

Si le lapin est « contaminé », son sérum possède des anticorps anti-BSA

Ces anticorps anti-BSA viennent se fixer sur la BSA qui tapisse le fond du puits.

Ces anticorps anti-BSA viennent se fixer sur la BSA qui tapisse le fond du puits. On vide ensuite le puits d’un geste rapide.

Puis le puits est lavé avec une solution tampon twin pour enlever les quelques anticorps non fixés.

Troisième étape: on verse l’anticorps de détection Troisième étape: on verse l’anticorps de détection. Il est couplé à une enzyme: la péroxydase.

Troisième étape: on verse l’anticorps de détection Troisième étape: on verse l’anticorps de détection. Il est couplé à une enzyme: la péroxydase.

Les anticorps de détection se fixent aux anticorps anti-BSA.

Les anticorps de détection se fixent aux anticorps anti-BSA.

Le puits est vidé et lavé deux fois avec le tampon twin

Le puits est vidé et lavé deux fois avec le tampon twin

Quatrième étape: On verse dans le puits la solution révélatrice contenant le substrat de la péroxydase: le TMB ( tétra-méthyl-benzidine).

Le TMB se colore en bleu en présence de l’enzyme

Le TMB se colore en bleu en présence de l’enzyme La coloration bleue indique donc la présence d’anticorps anti BSA. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration d’anticorps anti-BSA ; cette méthode permet donc un dosage par colorimétrie