L’analyse d’ADN et la génomique Page 21 Techniques de préparation d’échantillons homogènes d’ADN (copies) / ok Clonage d’un gène Celui-ci varie-t-il d’une personne à l’autre? Certains de ses allèles sont-ils liés à une maladie héréditaire? Où et quand est-il exprimé dans l’organisme? Quel est son emplacement dans le génome? Evolution COMMENT ?

Génomique CONNAÎTRE séquence nucléotidique du gène Page 21 CONNAÎTRE séquence nucléotidique du gène Individus même espèce Espèces différentes CONNAÎTRE séquence du génome Ensemble de gènes Interactions

PCR A la fin: Séparer les fragments d’ADN amplifiés → amplicons Electrophorèse (gel d’agarose) Comment ?

Electrophorèse

Electrophorèse sur gel Page 21 Principe Séparer des macromolécules (acides nucléiques ou protéines) en fonction de leur taille et de leur charge électrique.

Electrophorèse sur gel Page 21 Déroulement (3 étapes) Etape n°1

Electrophorèse sur gel Page 21 Déroulement (3 étapes) Etape n°2

Electrophorèse sur gel Page 21 Déroulement (3 étapes) Etape n°3

Electrophorèse (résultat) Le bromure d'éthidium (BEt ou EtBr)

Electrophorèse sur gel Applications Analyser l’ADN après une PCR Estimer le poids moléculaire de fragments d’ADN après une digestion (enzyme de restriction) Séparer des fragments d’ADN avant un Southern blot

Analyse des fragments de restriction (variations) Page 22 Idée Détecter indirectement certaines différences de séquences nucléotidiques au niveau de l’ADN.

Analyse des fragments de restriction (variations) Page 22 Principe Trier des fragments d’ADN (taille) résultant du découpage d’une longue molécule d’ADN par une enzyme de restriction.

Analyse des fragments de restriction (variations) Page 22 Déroulement Echantillons de gènes clonés et purifiés

Analyse des fragments de restriction (variations) Page 22 Déroulement

Analyse des fragments de restriction (variations) Page 22 Déroulement

Analyse des fragments de restriction (variations) Page 23 Possibilité d’effectuer le même genre de comparaison sans effectuer de clonage génique Génome entier En combinant l’électrophorèse sur gel et l’hybridation des acides nucléiques

Buvardage de Southern Page 23

Etape n°1 (enzyme de restriction) Page 23

Etape n°2 (électrophorèse) Page 23

Etape n°3 (Southern) Page 23

Etape n°4 (hybridation) Page 23

Etape n°5 (autoradiagraphie) Page 23

Buvardage de Southern Applications Localiser une séquence d’ADN Page 23 Applications Localiser une séquence d’ADN Etudier l’ADN non codant (majeure partie du génome des Animaux et des Végétaux) Existe-t-il entre les séquences non codantes des différences analogues à celles qui existent entre les allèles des gènes?

Etude de l’ADN non codant Page 23 OUI, de nombreuses différences existent. Les séquences d’ADN des chromosomes homologues présentent des variantes. Ces variations = polymorphismes de taille des fragments de restriction ou PTFR Très abondants

Carte génétique