L2 Tissus Sanguins Année 2013 – 2014 Le Lymphocyte B

Les Lymphocytes Population Hétérogène - Lymphocytes B - Lymphocytes T - Lymphocytes (ou cellules) NK Conventionnels Non Conventionnels (T- NK, MAIT)

Cellules dendritiques Immunité Adaptative Lymphocytes B (et T) Expression de récepteurs à l’antigène : BCR (TCR pour le lymphocyte T) Capacité de réponse mémoire Production et sécrétion de substances solubles, cytokines (interleukines, interféron...) Expression de divers récepteurs membranaires : - Coopération /dialogue/communication - Adhésion/migration... Cellules dendritiques Lymphocyte B Lymphocyte T NK Mastocytes Cellules endothéliales Macrophages

Le Lymphocyte B  Support de la réponse immunitaire humorale spécifique. Cellule capable de produire des immunoglobulines puis de les sécréter (plasmocytes). C'est aussi une cellule présentatrice d'antigènes, capable de moduler la réponse immunitaire, de contrôler le développement de certains lymphocytes (MAIT)  Exprime une grande variété de molécules (dont des récepteurs) : • spécifiques du lymphocyte B • non spécifiques  L’expression de certains molécule est constitutive, utile à l’identification des lymphocytes B : Recours l'aide d'anticorps monoclonaux ou polyclonaux spécifiques Microscope (cellules en suspension, sections tissulaires) Cytomètre en flux

Lymphopoïèse B Ag Plasmocyte B mature BCR Cellule souche B Mémoire

Lymphopoïèse B Médullaire Précurseurs hématopoïétiques (dont cellule souche multipotente) Neutrophiles Eosinophiles Basophiles Poly N (notion de plasticité cellulaire) Monocytes B Cellule Souche Lymphocytes T NK Erythroblastes GR Mégacaryocytes plaquettes Cellules Stromales (nourricières) Cytokines, facteurs de croissance, divers récepteurs, molécules d’adhésion…, Progression du cortex  Médullaire - Phénomène continu toute la vie

Lymphopoïèse B Débute tôt : - Souris : J12 vie in utero - Homme : 8ème semaine de vie in utero Processus continu -  avec âge Siège : - Vie fœtale : - Moelle osseuse - Foie / rate - Autres tissus (reins, poumons, épiploon) - Après naissance : - Moelle osseuse

1-2  106 B entrent dans la rate / jour Lymphopoïèse B Souris : Moelle osseuse 1-2  107 « B » / jour 1-2  106 B entrent dans la rate / jour # 8  106 naïfs dans la rate Homme : Moelle osseuse produit 108 lymphocytes B / jour

Cellule souche hématopoïétique Plasmocyte Chaîne lourde m Lymphocyte Pré-B Cellule souche hématopoïétique Lymphocyte B mature Moelle Osseuse B mémoire

Cellule souche hématopoïétique Lymphopoïèse B Cellule souche hématopoïétique Lymphocyte Pré-B Lymphocyte B mature Chaîne lourde m Iga= CD79a Igb= CD79b

Récepteur Pré-B VH VpréB Vpré-B 5 l5 b a a b µ ITAM

Cellule souche hématopoïétique Lymphopoïèse B Cellule souche hématopoïétique Lymphocyte Pré-B Lymphocyte B mature Chaîne lourde m

Cellule souche hématopoïétique Lymphopoïèse B Lymphocyte Pré-B Cellule souche hématopoïétique Lymphocyte Pro-B Lymphocyte B mature Chaîne lourde m Absence de réarrangement productif des gènes codant pour les chaînes lourdes ou légères des Igs

Si stimulation de l’IgM en surface ( BCR) Mort cellulaire par apoptose Lymphopoïèse B µ/CL IgM Lymphocyte Pro-B Lymphocyte Pré-B Lymphocyte B immature Lymphocyte B mature Si stimulation de l’IgM en surface ( BCR) Mort cellulaire par apoptose

Diversité des Immunoglobulines (diversité des spécificités anticorps) Configuration germinale (germline) VH D JH D-JH VHDJH - Segments VDJ réarrangés - Pour les chaînes légères : VJ (Pas de segment D) Recombinaison (RAG1 et RAG2)

Lymphopoïèse B Pré-BCR Pro-B Pro-B Pré-B DH JH VH VH DH JH Rag ½, Ku 70/80 DNA PK, DNA ligase IV, Artemis,Cernunnos

Lymphopoïèse B LC (chaîne légère) HC IgM IgM/IgD IgA IgG IgE JL VL Pré-B B immatures B matures Pro-B JL VL DH JH VH Grande taille Petite taille VH DH JH LC (chaîne légère) HC

Lymphopoïèse B Régulation Cellule souche Pro-B Pré-B B immature Ikaros, Pu-1 Pax5 E2A, EBF Cellule souche Pro-B Pré-B B immature B mature Plasmocyte B Mémoire Cytokines (IL7: souris++) Étapes Ag indépendantes Étapes Ag dépendantes

Signal de prolifération et de survie, inhibition de l’expression des Rag

Lymphopoïèse B Cellule souche Pro-B Pré-B B immature B mature Plasmocyte B Mémoire Étapes Ag indépendantes Étapes Ag dépendantes

Btk BLNK

Lymphopoïèse B Cellule souche Pro-B Pré-B B immature B mature Plasmocyte B Mémoire Rag Apoptose Editing Étapes Ag indépendantes Étapes Ag dépendantes

Lymphopoïèse B Cellule souche Pro-B Pré-B B immature B mature Plasmocyte B Mémoire Étapes Ag indépendantes Étapes Ag dépendantes

Organes Lymphoïdes Secondaires Prolifération clonale Lymphocyte B mémoire Antigène Prolifération clonale Lymphocyte B Immunoblastes Plasmocytes

Organes Lymphoïdes secondaires/ Centres Germinatifs Cortex Zone claire Zone du manteau Zone Sombre Centroblastes Centrocytes Zone Marginale Ag T indép Follicule primaire B Mature Naïf T Ag

Coopération entre Lymphocyte B et Lymphocyte T Ag Cellule Présentatrice d'Antigènes B7 1.2 (CD80/CD86) CD40 CD40L CD28 TCR CD3 + CTLA4 Lymphocyte T

Comment identifier les sous-populations lymphocytaires B?

CSH B Pre-B Pro-B C M CD34 CD10 CD79a CD79b LC CD19 CD20 C + S CD38 Plasmocyte B Pre-B Pro-B C C + S Tdt M µ/LC CD38 B mémoire Rag1/2 Rag1/2 Rag1/2 CD34 CD10 CD79a CD79b LC CD19 CD20

Précurseurs Lymphocytaires B  Lymphocytes Pro-B - Pas de réarrangement productifs des gènes codant pour les chaînes lourdes et légères des immunoglobulines - CD19+ - CD79a+, CD79b+, LC (Pseudo-chaînes légères) intracytoplasmiques - CD34+, CD113+ - RAG+ - Tdt+ (nucléaire)  Lymphocytes Pré-B - CD19+ CD79a+ CD79b+ (cytoplasmiques et en surface) - CD10+ - Chaîne lourde µ+ (Pas de réarrangement productifs des gènes codant pour les chaînes légères) (c + s) - LC+ - Jeunes lymphocytes Pré-B : CD34 (surface) RAG- (Noyau) CD20- - Lymphocytes Pré-B plus avancés : CD34- (surface) RAG+ (noyau) CD20+

 Lymphocyte B immature -CD19+ - CD79a+, CD79b+ - s IgM+ - CD20+ - LC- - CD40+ - La stimulation de l'immunoglobuline de surface induit à ce stade une morte cellulaire (Apoptose ++).  Lymphocytes B mature naïf : - CD19+ - sIg+  Passe dans le courant sanguin (150-450/mm3)  Majorité des lymphocytes B circulants La stimulation de l'Ig de surface induit une activation et une prolifération du lymphocyte B

Sous-populations lymphocytaires B B1: CD5+ et certains CD5- (sisters) Polyréactivité , Ac faible affinité Souris: séreuses B2: conventionnels B régulateurs B mémoires CD27+ Plasmablastes, Plasmocytes

Plasmocytes sIg – cIg+ CD19- CD20- CD38+ CD138+ CD79a-, CD79b+ Courte et Longue durées de Vie Transformation maligne: Myélome Multiple

Lymphocyte B BCR Une seule variété d’Ig par cellule TLR FcgRIIb + + HCV EBV BCR TLR CD19/CD81/CD21 CD40 FcgRIIb CD22 + + Une seule variété d’Ig par cellule

Conséquences de la stimulation du BCR Peuvent varier selon l’affinité de l’Ig, la mono ou la multivalence de l’Ag, la durée de la stimulation + Anergie Apoptose