Plan du cours INTRODUCTION 1. Introduction HEMATOLOGIE 2. Hémogramme 3. Erythrocytes 4. Leucocytes HEMOSTASE 5. Hémostase BIOCHIMIE 6. Glucose 7. Lipides.

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1 Plan du cours INTRODUCTION 1. Introduction HEMATOLOGIE 2. Hémogramme 3. Erythrocytes 4. Leucocytes HEMOSTASE 5. Hémostase BIOCHIMIE 6. Glucose 7. Lipides et cétones 8. Protéines 9. Equilibre hydrique et électrolytique 10. Minéraux 11. Hormones 12. Foie 13. Tractus gastro-intestinal (et pancréas) 14. Appareil urinaire 15. Muscles

2 3. Erythrocytes 3.1

3 3.1. Généralités 3.2. Paramètres mesurés et calculés 3.3. Morphologie normale et pathologique des GR 3.4. Réticulocytes et érythroblastes 3.5. Autres tests 3.6. Anémies 3.7. Polyglobulies 3.8. Algorithmes 3.2

4 3.1. Généralités voir cours 2 ème bac Erythrocytes = globules rouges = hématies (hémoglobine = 34% du poids) Hémoglobine Transport de l’O 2 3.3

5 - Fréquent - Conséquences: mauvaise oxygénation des tissus pâleur des muqueuses, abattement, inappétence -mécanismes de compensation: tachypnée, tachycardie - signes associés possibles: ictère, fièvre, splénomégalie… Diminution du nombre de GR (ou de l’hémoglobinémie) = Anémie Augmentation du nombre de GR (ou de l’hémoglobinémie) = Polyglobulie - Rare 3.4

6 3.1. Généralités 3.2. Paramètres mesurés et calculés 3.3. Morphologie normale et pathologique des GR 3.4. Réticulocytes et érythroblastes 3.5. Autres tests 3.6. Anémies 3.7. Polyglobulies 3.8. Algorithmes 3.5

7 3.2. Paramètres mesurés et calculés 1.Hématocrite (et protéinèmie) 2.Nombre d’érythrocytes circulants 3.Hémoglobinémie 4.Indices érythrocytaires Mesurés par l’automate d’hématologie Mesurée par l’automate de biochimie Calculés Hématocrite et protéinémie peuvent être mesurées au cabinet -Hématocrite par centrifugation d’un tube de sang -Protéinémie à l’aide d’un réfractomètre (voir chapitre 1) 3.6

8 Hématocrite = pourcentage du volume globulaire (globules rouges) par rapport au volume sanguin total, exprimé en % ou en L/L Mesurée par l’automate d’hématologie ou par centrifugation (au cabinet) 3.2.1. Hématocrite (et protéinémie) Erythrocytes Plasma (renseigne aussi sur hémolyse, ictère, lipémie, déshydratation…) Buffy coat = Globules Blancs (leucocytes) 3.7

9 Protéinémie (concentration des protéines plasmatiques; g/L) Mesurée par l’automate de biochimie ou par le réfractomètre (au cabinet) Intérêt: Estimer si l’animal est déshydraté 3.8

10 Valeurs de référence: voir chapitre 1 Interprétation des résultats: Augmentation de l’hématocrite Polyglobulie si associée à une augmentation des protéines plasmatiques déshydratation (polyglobulie fausse) Diminution de l’hématocrite Anémie si associée à une diminution des protéines plasmatiques Anémie par perte de sang (hémorragie) 3.9

11 3.2.2. Nombre d’érythrocytes circulants et hémoglobinémie Mesurés par l’automate d’hématologie (GR; 10 12 /L) ou de biochimie (hémoglobinémie; g/L) Donnent les mêmes indications que l’hématocrite (polyglobulie ou anémie) Permettent de calculer les indices érythrocytaires 3.10

12 3.2.3. Indices érythrocytaires 3.2.3.1. VGM (Volume Globulaire Moyen) ou MCV (mean cell volume) VGM (fl) = Hématocrite (L/L) x 1000/nombre GR (10 12 /L) exprimé en femtolitres (fl) donne une idée de la taille moyenne d’un érythrocyte NORMOCYTOSE (taille normale) MICROCYTOSE (taille trop faible) MACROCYTOSE (taille trop élevée) 3.11

13 3.2.3.2. CCMH (Concentration Corpusculaire Moyenne en Hémoglobine) et TCMH (Taux Corpusculaire Moyen en Hémoglobine) CCMH = MCHC (Mean Cell Haemoglobin Concentration) TCMH = MCH (Mean Cell Haemoglobin) CCMH (g/L) = Hémoglobinémie (g/L) / Hématocrite (L/L) TCMH (pg/GR) = Hémoglobinémie (g/L) / nombre GR (10 12 /L) donnent une idée de la concentration moyenne en hémoglobine dans les GR NORMOCHROMIE (concentration normale) HYPOCHROMIE HYPERCHROMIE (souvent artéfactuelle) CCMH meilleur que TCMH 3.12

14 3.1. Généralités 3.2. Paramètres mesurés et calculés 3.3. Morphologie normale et pathologique des GR 3.4. Réticulocytes et érythroblastes 3.5. Autres tests 3.6. Anémies 3.7. Polyglobulies 3.8. Algorithmes 3.13

15 3.3. Morphologie normale et pathologique des GR Frottis: voir chapitre 2 3.3.1. Morphologie normale CHIEN CHAT Volumineux, Uniformes Pâleur centrale Moins volumineux, ANISOCYTOSE (taille variable) Pas de pâleur centrale 3.14

16 CHEVALRUMINANTS Rouleaux Forte anisocytose Crénation (échinocytes) 3.15

17 OISEAUX Volumineux Ovoïdes NUCLEES! 3.16

18 3.3.2. Morphologie pathologique 1. Anomalies de taille -Macrocytose -Microcytose -Anisocytose pathologique 2. Anomalies de couleur -Polychromie -Hypochromie 3. Anomalies de forme (Poïkilocytose) -Sphérocytose -Anomalies non-spécifiques 4. Anomalies de distribution -Rouleaux (pathologiques) -Auto-agglutination 5. Corps d’inclusion 3.17

19 3.3.2.1. Anomalies de taille MACROCYTOSE (VGM ↑ ) Réticulocytose (anémie régénérative) FeLV (maturation altérée des GR) MICROCYTOSE (VGM ↓ ) Déficit en Fer (anémie ferriprive) Réticulocyte = jeune GR de grande taille (immature, non nucléé) libéré prématurément dans la circulation lors d’anémie par perte de sang ou par hémolyse (anémies régénératives; dans ces cas, la moelle a la capacité de produire de nouveaux GR). Voir plus loin. 3.18

20 ANISOCYTOSE PATHOLOGIQUE GR de tailles variables Exemple 1: anémie régénérative par perte de sang Réticulocytes (grande taille) + GR matures (taille normale) GR Réticulocyte Ici, anisocytose pathologique associée à une macrocytose (VGM ↑) 3.19

21 Exemple 2: anémie régénérative due à une hémolyse médiée par le système immunitaire Réticulocytes (grande taille) + GR matures (taille normale) + Sphérocytes (petite taille) (explication à la dia suivante) GR Sphérocyte Réticulocyte Ici, anisocytose pathologique non associée à une macrocytose! (VGM =) 3.20

22 Production des sphérocytes (phénomène extravasculaire; rate) Antigène du non Soi: agent pathogène intracellulaire ou Antigène du Soi (auto-immunité) Anticorps dirigé contre l’antigène du Soi ou du non Soi SANG RATE GR Sphérocyte (dense, petit) libéré par le macrophage GR Macrophage Récepteur Fc (phagocytose) Portion phagocytée du GR (membrane stt) 3.21

23 3.3.2.2. Anomalies de couleur HYPOCHROMIE POLYCHROMIE Sphérocyte Réticulocyte GR Réticulocytes plus basophiles (bleus) Anémie régénérative (Ici, hémolytique à médiation immune chez le CN) Annulocytes Anémie ferriprive 3.22

24 3.3.2.3. Anomalies de forme = POIKILOCYTOSE SPHEROCYTOSE voir ci-avant Spécifique des anémies régénératives hémolytiques à médiation immune Visible surtout chez le CN! ANOMALIES NON SPECIFIQUES Echinocytes Acanthocytes Schizocytes Cellules « cibles » 3.23

25 ECHINOCYTES (épines, crénations) Normal: chez le porc et les ruminants Souvent artéfactuel Pathologique: chimiothérapie (doxorubicine), ulcères ou tumeurs gastriques, glomérulonéphrite 3.24

26 ACANTHOCYTES (doigts de gant) Maladies hépatiques Hémangiosarcome ou hémangiome Coagulation intravasculaire disséminée (CIVD) Glomérulonéphrite 3.25

27 SCHIZOCYTES (déchirés, fragmentés) Destruction brutale des GR quand passage dans capilaires de petite taille Observés lors de maladies vasculaires Coagulation intravasculaire disséminée (CIVD) Néovascularisation tumorale (hémangiosarcome) Cardiopathies congestives Microangiopathies (rein, foie, rate…) 3.26

28 CELLULES « CIBLES » (point central) Maladies hépatiques 3.27

29 3.3.2.4. Anomalies de distribution ROULEAUX Normal: chez le CV Pathologique: lors d’inflammation chez les petits animaux Coronavirose chez le CT, leishmaniose chez le CN 3.28

30 AUTO-AGGLUTINATION Si les GR sont porteuses d’antigènes du non SOI (agents pathogènes) ou du Soi (auto-immunité) (voir ci-avant), ils peuvent être agglutinés par les IgM circulants dirigés contre ces antigènes 3.29

31 macroscopiquemicroscopique Suggère une anémie hémolytique à médiation immune (voir ci-avant) 3.30

32 3.3.2.5. Corps d’inclusion CORPS DE HOWELL-JOLLY Restes de noyau Normal: jusque 1% des GR chez le CT, CV aussi Pathologique: surtout trouvés lors d’anémies régénératives Iatrogène: splénectomie, glucocorticoïdes, agents chimiothérapeutiques 3.31

33 PIQUETAGE BASOPHILE - Anémies régénératives, surtout chez les ruminants (utile car pas de réticulocytes chez RT) - Intoxication au plomb (toutes les espèces) 3.32

34 CORPS DE HEINZ Boursouflures apparaissant lorsque l’Hbine est oxydée (Hbine oxydée est rejetée de cette manière) May-Grunwald-GiemsaNew Methylene Blue 3.33

35 Causes: -Normal chez le CT (jusque 5%) -Pathologique: substances oxydantes Certains médicaments (paracétamol) Certains additifs alimentaires Oignons (toutes espèces) Choux et seigle d’hiver (RT) Feuilles d’érable (CV) 3.34

36 AGENTS PATHOGENES Babesia canis Mycoplasma haemofelis (ex-Haemobartonella felis) 3.35

37 3.1. Généralités 3.2. Paramètres mesurés et calculés 3.3. Morphologie normale et pathologique des GR 3.4. Réticulocytes et érythroblastes 3.5. Autres tests 3.6. Anémies 3.7. Polyglobulies 3.8. Algorithmes 3.36

38 3.4. Réticulocytes et érythroblastes Réticulocyte = jeune GR de grande taille (immature, non nucléé) libéré prématurément dans la circulation lors d’anémie par perte de sang ou par hémolyse (anémies régénératives; dans ces cas, la moelle a la capacité de produire de nouveaux GR). Voir plus loin. 3.4.1. Réticulocytes 3.4.1.1. Généralités Comptage permet de distinguer les anémies régénératives des anémies non-régénératives 3.37

39 3.4.1.2. Comptage On compte le nombre de réticulocytes par 500 ou 1000 GR (FROTTIS pas automate!) May-Grunwald-Giemsa Réticulocytes plus grands et plus basophiles (bleus), peu fiable macrocytose et polychromie Réticulocyte GR 3.38

40 Coloration de ROMANOWSKY 3.39

41 Coloration au New Methylene Blue ou au Bleu de Crésyl Brillant Le plus utilisé! Met en évidence l’ARN (surtout ribosomal) résiduel CHIEN Réticulocytes réticulés seulement CHAT Réticulocytes réticulés (flèche rouge) et réticulocytes ponctués (fléche noire) Réticulocytes ponctués = Réticulocytes plus vieux Maturation des réticulocytes très lente chez le CT 3.40

42 1. Comptage du nombre de réticulocytes par 500 ou 1000 GR (FROTTIS) -exemple: 10 reticulocytes / 500 GR 2. Calcul du pourcentage de réticulocytes -exemple: pourcentage de réticulocytes = 10/500 x 100 = 2% 3. Calcul du nombre absolu de réticulocytes sur base du comptage des GR par l’automate d’hématologie Nombre absolu de réticulocytes (/µL) = Pourcentage de réticulocytes/100 (fraction) x nombre de GR (/µL) 4. Comptage corrigé des réticulocytes (%) = (Hématocrite du patient/ Hématocrite normale) x pourcentage de réticulocytes Hématocrite normale: 45 CN et 37 CT 3.41

43 Exemple de comptage corrigé des réticulocytes CN: 6% de réticulocytes et 9% d’hématocrite (anémie sévère) Comptage corrigé des réticulocytes = (Hématocrite du patient/ Hématocrite normale) x pourcentage de réticulocytes = (9/45) x 6 = 1,2% Utilisé pour savoir si le nombre de réticulocyte est réellement augmenté 3.42

44 3.4.1.3. Spécificités CHIEN < 1% réticulocytes réticulés (jeune: 5-7%!!) < 80.000 réticulocytes/µL Anémie régénérative suspectée si: -Nombre corrigé de réticulocytes > 1% -Nombre absolu de réticulocytes > 80.000/µL 3.43

45 CHAT < 0,4% réticulocytes réticulés 1 à 10% de réticulocytes ponctués < 30.000 réticulocytes réticulés/µL Jusque 500.000 réticulocytes ponctués/µL Anémie régénérative suspectée si: -Nombre corrigé de réticulocytes réticulés > 0,4% -Nombre corrigé de réticulocytes ponctués > 10% -Nombre absolu de réticulocytes réticulés > 30.000/µL 3.44

46 CHEVALRUMINANTS On considère qu’il n’y a pas de réticulocytes dans le sang de ces animaux Même s’il y en a un peu chez les ruminants, pas de diagnostic fiable RUMINANTS Le piquetage basophile peut indiquer une régénération 3.45

47 3.4.2. Erythroblastes Précurseurs nucléés des réticulocytes Signent une régénération également (visibles sur le frottis!! pas à l’automate!) 3.46

48 3.1. Généralités 3.2. Paramètres mesurés et calculés 3.3. Morphologie normale et pathologique des GR 3.4. Réticulocytes et érythroblastes 3.5. Autres tests 3.6. Anémies 3.7. Polyglobulies 3.8. Algorithmes 3.47

49 3.5. Autres tests 3.5.1. Test de Coombs direct Principe: mettre en évidence les anémies hémolyiques à médiation immune Antigène du non Soi: agent pathogène intracellulaire ou Antigène du Soi (auto-immunité) Anticorps dirigé contre l’antigène du Soi ou du non Soi GR + Anticorps dirigés contre les anticorps de l’espèce GR AGGLUTINATION!! Pas d’agglutination si pas d’antigène présenté à la surface des GR 3.48

50 Exemple de résultats Agglutination Pas d’agglutination Beaucoup de faux négatifs (ne pas conclure définitivement si négatif!) Nécessite des anticorps dirigés contre les anticorps de l’espèce 3.49

51 3.5.2. Vitesse de sédimentation Vitesse à laquelle les GR sédimentent Si vitesse augmente suspicion de phénomène inflammatoire ou immun Moins utilisé qu’auparavant car peu spécifique 0 0 X 3.50

52 3.1. Généralités 3.2. Paramètres mesurés et calculés 3.3. Morphologie normale et pathologique des GR 3.4. Réticulocytes et érythroblastes 3.5. Autres tests 3.6. Anémies 3.7. Polyglobulies 3.8. Algorithmes 3.51

53 3.6. Anémies 3.6.1. Généralités Définition: diminution de l’hématocrite, de la concentration en hémoglobine, et/ou du nombre de GR Anémie régénérative non régénérative hémorragique hémolytique désordre primaire de la moelle osseuse désordre secondaire de la moelle osseuse 3.52

54 3.6.2. Anémies régénératives Anémie régénérative non régénérative hémorragique hémolytique désordre primaire de la moelle osseuse désordre secondaire de la moelle osseuse 3.53

55 Signes d’anémie régénérative RETICULOCYTOSE (moelle intacte capable de produire de nouveaux GR) MACROCYTOSE (↑VGM; automate) POLYCHROMIE (réticulocytes sont plus basophiles; frottis) ANISOCYTOSE (réticulocytes sont plus grands; frottis) Attention: chez CN dans le cas d’anémie hémolytique à médiation immune sphérocytose pas toujours de macrocytose 3.54

56 3.6.3. Anémies régénératives hémorragiques Anémie régénérative non régénérative hémorragique hémolytique désordre primaire de la moelle osseuse désordre secondaire de la moelle osseuse 3.55

57 Signes d’anémie régénérative hémorragique (perte de sang) Signes d’anémie régénérative + HYPOPROTEINEMIE (automate de biochimie ou refractomètre) due au fait que les protéines sont perdues en même temps que les GR La réponse réticulocytaire n’est détectée qu’après 3-4 jours !! CAUSES d’hémorragies aigues: -Traumatismes -Chirurgie -Troubles de la coagulation -Ulcérations gastriques ou intestinales -Parasitose sévère -Tumeurs intestinales -… 3.56

58 Hémorragies chroniques La perte de fer chronique conduit à une anémie FERRIPRIVE MICROCYTOSE (↓VGM; automate) HYPOCHROMIE (↓CCMH et TCMH; automate) Diminution progressive du nombre de réticulocytes ANNULOCYTES (frottis) CAUSES d’hémorragies chroniques: -Ulcérations ou tumeurs gastro-intestinales -Troubles de la coagulation -Parasitose -… 3.57

59 Causes des anémies régénératives hémorragiques (3.58)

60 3.6.4. Anémies régénératives hémolytiques Anémie régénérative non régénérative hémorragique hémolytique désordre primaire de la moelle osseuse désordre secondaire de la moelle osseuse 3.59

61 Signes d’anémie régénérative hémolytique (destruction des GR) Signes d’anémie régénérative + PROTEINEMIE NORMALE ou légèrement augmentée (automate de biochimie ou refractomètre) Autres signes possibles: Plasma hémolysé (rouge) ou ictérique (jaune) (dans le cas d’une anémie hémorragique, le plasma a une couleur normale) Morphologie des GR modifiée (Corps de Heinz, sphérocytes, présence de parasites…) Hémoglobinurie Ictère (visible au niveau des muqueuses) 3.60

62 Classification ANEMIE HEMOLYTIQUE INTRAVASCULAIRE (dans les vaisseaux) EXTRAVASCULAIRE (dans la rate) 3.61

63 ANEMIES HEMOLYTIQUES INTRAVASCULAIRES CAUSES d’hémolyse intravasculaire: -Parasites (Babesia, Mycoplasma haemofelis…) -Lésions vasculaires (hémangiosarcome, CIVD,dirofilariose…) -Dommages oxydatifs (paracétamol, oignons…) -… DIAGNOSTIC d’hémolyse intravasculaire: -Parasites: visibles sur le frottis, sérologie, PCR -Lésions vasculaires: schizocytes et/ou acanthocytes (hémangiosarcome) sur frottis -Dommages oxidatifs: corps de Heinz sur le frottis -Dans tous les cas, une hémolyse peut être visible (plasma) -Hémoglobinurie 3.62

64 ANEMIES HEMOLYTIQUES EXTRAVASCULAIRES CAUSES d’hémolyse extravasculaire: ANEMIE HEMOLYTIQUE A MEDIATION IMMUNE Les GR portent des antigènes: -du non-SOI (GR infectés) -du SOI (auto-immunité) détruits par les macrophages de la rate (voir plus haut) DIAGNOSTIC d’hémolyse extravasculaire: -Plasma ictérique possible (pas d’hémolyse!) -Présence de sphérocytes sur le frottis (CN) -Auto-agglutination (sur lame) -Test de Coombs positif (attention aux faux négatifs) -Parfois hémoglobinurie (+ rare que si intravasculaire) 3.63

65 Causes d’anémies hémolytiques (3.64)

66 Causes d’anémies hémolytiques d’origine infectieuse (3.65)

67 3.6.5. Anémies non régénératives Anémie régénérative non régénérative hémorragique hémolytique désordre primaire de la moelle osseuse désordre secondaire de la moelle osseuse 3.66

68 Signes d’anémie non régénérative -Absence de réticulocytose (frottis) -NORMOCYTOSE (VGM normal; automate) -NORMOCHROMIE (CCMH, TCMH normaux; automate) -Absence de polychromie (frottis) -Absence d’anisocytose (frottis) 3.67

69 CAUSES d’anémies non régénératives: Désordres primaires: -Aplasie ou hypoplasie médullaire -Myélodysplasie -Virus (FELV, parvovirus canin) -Médicaments: oestrogènes, immunosuppresseurs, AINS) Attention: dans le cas du FeLV: MACROCYTOSE (↑VGM) Désordres secondaires: -Maladies inflammatoires chroniques -Certains désordres endocriniens -Maladies rénale (↓EPO) 3.68

70 Causes d’anémies non-régénératives (suite) (3.69)

71 Diagnostic Désordres primaires: -Myélogramme -Peut être associé à une leucopénie et/ou thrombocytopénie (si aplasie ou hypoplasie concerne toutes les lignées myéloïdes) Désordres secondaires: - Signes de la maladies causale (ex. ↑urémie et créatininémie si problème rénal chronique) 3.70

72 Diagnostic (suite) Si anémie non régénérative et Si anémie normocytaire, normochrome Comptage des NEUTROPHILES NormalDiminué Augmenté Aplasie ou hypoplasie érythroïde Aplasie ou hypoplasie généralisée Myélodysplasie Inflammation 3.71

73 ATTENTION: Une abscence de réticulocytose (non régénération) peut-être observée dans le cas d’anémies hémorragiques ou hémolytiques si: -Hémorragie ou hémolyse récente (3-4 jours) -Hémorragie chronique (anémie ferriprive; microcytose, hypochromie, annulocytes) -Animaux ne montrant pas de réticulocytose (CV, RT); dans ce cas le seul signe peut être une légère augmentation du VGM (+ piquetage basophile chez les RT) 3.72

74 3.6.6. Tables (3.73)

75 (3.74)

76 3.1. Généralités 3.2. Paramètres mesurés et calculés 3.3. Morphologie normale et pathologique des GR 3.4. Réticulocytes et érythroblastes 3.5. Autres tests 3.6. Anémies 3.7. Polyglobulies 3.8. Algorithmes 3.75

77 3.7. Polyglobulies (érythrocytose) Définition: augmentation de l’hématocrite, de la concentration en hémoglobine, et/ou du nombre de GR Classification: Polyglobulie relative Déshydratation Contraction splénique (stress, exercice, douleur) Polyglobulie absolue (réelle) Primaire (polycythemia vera) (maladie myéloproliférative rare) Secondaire Hypoxie Compensation par augmentation de la production d’EPO Ex. Maladies cardiaques/pulmonaires chroniques Altitude CN brachycéphale Tumeur rénale Production d’EPO inappropriée 3.76

78 Causes de polyglobulies (3.77)

79 Diagnosic différentiel Déshydratation ↑ protéinémie Hypoxie ↓PaO 2 Tumeur rénale ↑EPO (tests rarement proposé!) Polycythemia vera aucun des signes précedents 3.78

80 3.1. Généralités 3.2. Paramètres mesurés et calculés 3.3. Morphologie normale et pathologique des GR 3.4. Réticulocytes et érythroblastes 3.5. Autres tests 3.6. Anémies 3.7. Polyglobulies 3.8. Algorithmes 3.79

81 3.8.1. Anémies 3.8. Algorithmes (3.80)

82 3.8.2. Anémies régénératives (3.81)

83 3.8.3. Anémies non régénératives ou faiblement régénératives (3.82)

84 3.8.4. Polyglobulies (3.83)