FivFrance Formation.

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1 FivFrance Formation

2 Les techniques d’amélioration du sperme 1 -TMS TEST DE MIGRATION-SURVIE

3 Champ d’application du TMS
En France, cet examen fait partie du bilan pré-AMP (obligatoire) Dès que l’on envisage l’éventualité d’une technique telle que -l’IIU -La FIV -L’ISCI Il est associé généralement aux tests sérologiques obligatoires pour l’homme et pour la femme, afin de protéger la grossesse : Hépatite B et C, HIV, syphilis, … - Rubéole et Toxoplasmose, chez la femme

4 LE TMS Est effectué lors avec d’un spermogramme de seconde intention
La préparation du sperme se fait par une des techniques utilisées en AMP swim-up ou Gradient de densité Lecture des résultats après préparation : - Numération - Mobilité - Contrôle de la mobilité résiduelle après 24 heures en milieu de culture.

5 Quelle technique de préparation du sperme choisir ?
- Celle qui est utilisée habituellement pour Faire les préparations d’IAC - Avec les mêmes réactifs et le même consommable

6 Résultats Les résultats du test (numération - mobilité) conditionnent la technique d’AMP « Probablement » utilisable Une IIU est possible si après le test : 1 -Le spermocytogramme est acceptable (kruger sup. à 15%) 2 -La récupération des spermatozoïdes est suffisante Pour inséminer de SPZ mobiles sous un volume de 250 l (soit /ml, en concentration) Sinon -> FIV ou ICSI, selon les autres caractéristiques du sperme. La lecture de la mobilité à 24 heures, à 37°C., permet de vérifier qu’une FIV est possible. (> % vivants, même peu mobiles, le lendemain)

7 Apport du TMS aux différentes situations possibles
NUM. MOB. MORPH. ACAS Germes SURVIE TMS TECHN. 1ere intention Normale Diminuée Normale Normale Absence Absence Négatif Normale IAC* Diminuée Absence Bonne Mauvaise IAC*/FIV ICSI Présence < 50% FIV ? Normale Diminuée Présence > 50% * IAC : 4 tentatives max, 6 exceptionnellement

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9 INSEMINATION INTRA UTERINE : IIU, IAC

10 OBJECTIFS CONCENTRER ET LAVER les SPZ, dans le but de pouvoir les injecter directement dans l’utérus. EVITER le passage d’une glaire cervicale hostile AUGMENTER le nombre de spermatozoïdes aux alentours directs de l’OVOCYTE Cette manipulation se fait après stimulation ovarienne (FSH ou HMG) à un moment bien précis : 36 heures après le Déclenchement artificiel de l’ovulation par HCG

11 INDICATIONS Facteurs féminins : - Facteurs cervicaux : Facteurs quantitatif ou qualitatif, souvent révélés par plusieurs tests de Huhner négatifs, Facteurs Masculins : - Anomalies modérées du spermogramme, après élimination des causes : - Ejaculations rétrogrades - Anomalies anatomiques (hypospade) - Impuissance d'ordre psychologique Stérilités inexpliquées : Chez la femme jeune, après plusieurs essais de stimulations simples.

12 CONDITIONS A RASSEMBLER POUR FAIRE UNE IAC 1 - S’assurer, par un test de Migration survie (TMS) que l’IAC est possible : Récupération d’au moins 4 millions de SPZ par ml Soit 1 million/ microlitres 2 - S’assurer que l’indication féminine est compatible : Présence de trompe fonctionnelle 3 - S’assurer que les tests sérologiques ont été faits: hepB,C, HIV…

13 (6) ? IAC : Nombre de tentatives raisonnables
Avant de changer de technique (FIV) : (6) ? Tendances à une surconsommation en dehors des centres d’AMP.

14 Stimulation ovarienne et IIU
«Recommandée »

15 TIMING : stimulation ovarienne et IIU

16 TIMING : stimulation ovarienne et IIU

17 PREPARATION DE L’IAC Recueil du sperme au laboratoire Vérification de l’identité du patient avec identification de la patiente Recueil avec une aseptie maximum Traitement impératif du sperme dans l’heure qui suit le recueil Le type de traitement du sperme peut varier en fonction de sa qualité de départ

18 LES TECHNIQUES D’AMÉLIORATION DU SPERME :
1 - LE SWIM-UP 2 - LE GRADIENT DE DENSITE

19 Matériel spécifique - Hotte à flux laminaire (Manipulation stérile)
- Etuve à 37°C. - Centrifugeuse (réfrigérée, si très utilisée) Graduée en « G »

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22 SWIM-UP

23 SWIM-UP Réactifs 1 - Solution de lavage (pauvre en Ca++)
2 - Milieu de culture pour gamètes contenant de l’albumine (milieu d’attente et d’insémination).

24 Matériel stérile à usage unique
CONSOMMABLES Matériel stérile à usage unique Pipettes, cônes jaunes et bleus type  « Eppendorf » Grands tubes coniques de 15 ml.ou de 5 ml, petits tubes  Eppendorf compatibles avec la survie des SpZ. Tubes et contenants en matière compatible avec la culture cellulaire Cathéter de transfert, seringue stérile de 1 ml.

25 Technique Swim-Up : IAC

26 Technique Swim-Up : IAC

27 Technique Swim-Up : IAC

28 Technique Swim-Up : IAC

29 Technique Swim-Up : IAC

30 Gradient de densité

31 Les Réactifs : Gradient de densité
l’utilisation du Percoll* (microbilles enrobées par du PVP) est abandonnée  Microbilles de silice silanisées formant un colloïde Pour Techniques avec gradient discontinu de densité 1 - Solution de lavage (pauvre en Ca++) 2 - Solution mère de gradient (100%) tampon de dilution Ex : Puresperm 100* NIDACON ou Sil-Select Stock – FERTIPRO - Ou Kit de solution prêtes à l’emploi (40 /80 ou %) 3 - Milieu de culture pour gamètes (milieu d’attente).

32 Gradient de densité discontinu

33 Gradient de densité discontinu

34 Gradient de densité discontinu

35 Gradient de densité discontinu

36 Gradient de densité discontinu

37 Gradient de densité discontinu

38 Gradient de densité discontinu

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40 Tableau comparatif : des techniques pour IIU
Sélection Lavage simple Swim-up gradient Type de sélection des SPZ Aucune Oui (mobilité) Oui (densité N.) Rendement en SPZ normaux = + +++ Rendement en SPZ mobiles ++ ++++ Propreté de la préparation Elimination des leucocytes non Elimination débris, germes etc…. +/- Production de radicaux libres Praticabilité Coût Restrictions d’utilisation Pour - Très bons sperme « Bons » spermes Non contaminés

41 Facteurs défavorisants
1 - Age de la Femme 2 - Infertilité inexpliquée 3 - Nombre de spermatozoïdes inséminés ( < 1 million) 4 - Temps passé entre la préparation du sperme et son insémination

42 Importance du timing de l’insémination :
D’après P. Fauque (fertility and sterility, june 2014) Cette étude montre, pour la première fois qu’un delai de 40 à 80 minutes, compris entre la fin de la préparation du sperme et son insémination : peut augmenter significativement le taux de grossesse. - Un temps d’incubation de 40 minutes est probablement nécessaire Pour augmenter la decondensation de la chromatine des SPZ. Facteur connu comme favorable dans le processus de fécondation. - Temps sup. a 80 mn : effet Délétère environnementale sur le spermatozoïde ? Taux de réaction chromosomique plus élevé sans présence de l’Ovocyte

43 UTILISATION du cathéter

44 Capacité du cathéter Volume cavité utérine : 250 microlitres (+/-).

45 RESULTATS : 3 à 20 % selon les critères suivants : Les résultats du test de Migration-survie TMS - L’indication - la qualité et le suivi de la stimulation ovarienne - la qualité de la préparation du sperme - Le moment de l’insémination Utiliser la suspension de sperme 50 à minutes après sa préparation Faire l’insémination 34 à 37 heures après le déclenchement de l’ovulation 3 4

46 QUE PROPOSER EN CAS D’ECHEC ?

47 QUE PROPOSER EN CAS D’ECHEC ?
Renouveler les IAC : 4 fois - Si échecs répétés Consulter dans un centre d’AMP Proposition de FIV : A la première tentative de FIV et en l’absence De résultat : si embryons, on peut renouveler les FIV Si absence d’embryons -> passer à l’ICSI

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