Présentée par: Mme LIAMANI Ouafia Doctorante en biologie Option: biologie de la reproduction Cryodécapage Technique moderne de cytologie Etude des membranes.

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1 Présentée par: Mme LIAMANI Ouafia Doctorante en biologie Option: biologie de la reproduction Cryodécapage Technique moderne de cytologie Etude des membranes cellulaires l'observation avec un (MET)

2 congélation ou utilisation de froid Cryo élimination de la partie superficielle d’un objet Décapage Enlever la partie superficielle d’un objet par congélation

3 éviter une fixation chimique éviter tout artefact étudier la morphologie ou l’ultra-structure Intérêt

4 Congélation Coupe ou cryofracture Décapage Ombrage métallique Isolement des répliques Observation au MET

5 1- Congélation

6 Définition: Un processus de fixation très rapide Action de soumettre au froid un échantillon But: Assure une bonne conservation de la moindre petite structure. Méthode: congelé dans l’azote liquide à -196°C jusqu'à -200°C par le biais du fréon

7 Congélation dans l’azote liquide Azote liquide

8 2- Coupe ou cryofracture

9 Définition: Coupe au froid. But: Une légère cryodessiccation ou cryofracture décape la surface de l’échantillon Méthode: Lame d’acier refroidie par l’azote liquide, permet une coupe faite de manière à obtenir une surface lisse

10 Détails des 2 feuillets membranaires dénudés

11 3-Décapage

12 Définition: élimination de la partie superficielle d’un objet But: Augmenter le pouvoir de résolution une étape de sublimation Méthode: se fait sous vide élevé (10 -6 Barr).En approchant à 2 mm environ de la surface de l’échantillon qui est à -100°C une plaque portée elle-même à une température de 126°C

13 La glace est éliminée de la surface par sublimation Membrane nucléaire à nu, avec ses protéines et ses particules Plaque chauffante à 126°C -100°C 2mm

14 4- Ombrage métallique

15 Définition: Transformation d'un élément transparent en un élément opaque pour l'observation au microscope But: Faire ressortir tous les détails superficiels de la cellule Méthode: 1 ère vaporisation verticale d’une mince couche de carbone, c’est la réplique carbonée ; cette dernière est ombrée par 2 ème vaporisation oblique de platine

16 carbone Dépôt d’un film continu de carbone à la surface platine Ombrage de la surface par un film de platine

17 5- Isolement des répliques

18 H 2 SO 4 HCL Elimination de la partie organique par un acide minéral

19 Isolement de la réplique Réplique carbone-métal

20 6- Observation au MET

21 Microscope électronique à transmission

22 Cellule végétale (Euglena gracilis )observer au MET après cryodécapage

23 Appareil de Golgie observer au MET après cryodécapage

24 Une portion de chloroplaste de chlamydomonas (algue unicellulaire) observer au MET après cryodécapage